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操千曲尔后晓声，观千剑尔后识器。——刘勰
抗体溶液外观变色的机理和解决策略探讨
抗体溶液的外观在产品放行检测时是一个重要的质量参数。如果
某一批抗体在储存过程中外观颜色的变化意味着产品可能被污染、有
杂质或降解产物，这进一步反应可能是这批生产过程中出现了问题。
生产批次作废导致的经济损失是一方面，另外一个可能碰到的问题是
临床试验过程中，抗体产品颜色变化导致和安慰剂的颜色不一样，不
再是双盲。本文简单探讨一下这种外观变色的机理和解决策略。抗体
DS（原液）变色的第一次报道大约在十年前，也就是化学成分限定的
培养基（以下简称CD培养基）开始应用于生产以减少批次间差异的时
候，也是高浓度皮下注射抗体制剂开始开发的时候。化学成分限定的
培养基成分非常多，有些多达上百种化合物，这些化合物和抗体药物
相互作用的机理还不是很清楚。下面我们先讨论上游细胞培养工艺对
抗体溶液颜色的影响。
图一左：黄色的抗体DS，右：抗体DS在近紫外-可见光照射后
的颜色变化铁离子在CHO细胞的生长和蛋白表达中起到很重要的作用，
有研究表明提高铁离子浓度会显著提高蛋白质的产量。然而，
Vijayasankaran研究组第一次发现当CD培养基的铁离子浓度达到
75mM时会对产品的质量产生影响，例如加深了产品颜色（如下图1
左）和酸性峰。需要注意的是，铁离子并不是直接影响产品的颜色，
一般经过下游纯化后仅有非常低的铁离子会进入最终产品。一种假设
是铁离子通过提高ROS（活性氧）催化了抗体产品的氧化反应。这种
天将降大任于斯人也，必先苦其心志，劳其筋骨，饿其体肤，空乏其身，行拂乱其所为。——《孟子》
假设的机理在后来的实验中被证实。研究通过LC/MS发现高铁培养基
表达纯化的抗体中的暴露于蛋白表面的两个Trp（色氨酸）在近紫外-
可见光条件下（如图一右）会逐渐被氧化形成NFK（N-
formylkynurenine）和Kyn（kynurenine），这两种化合物都是显黄
色，4天的黄色主要由NFK和OH-Trp造成，14天的深颜色主要归咎
于Kyn。具体反应机理如下图二：
图二色氨酸的氧化路径
维生素B12是另一种常见的会导致最终抗体溶液产生异常颜色的
培养基成分。B12在CHO细胞生长过程中是必需的，在碳单元转移和
DNA合成中扮演辅酶作用。B12有四种异构体（cyano-、hydroxo-、
adenosyl-、methyl-cobalamin），这四种在水溶液中都是深红色。
Prentice等第一次报道了B12导致抗体溶液变成粉色的外观，他们的
研究发现是B12的其中一种异构体hydroxo-B12可以和抗体发生结
合，且不能在下游纯化工艺中去除。但是奇怪的是，在该培养基中使
用的是cyano-B12，一种推测是光照使得cyano-B12转换为
hydroxo-B12，该推测在小规模实验中得到证实。关于B12和抗体结
合的机理，在另一个报道中发现hydroxo-B12的Co
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