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蔬菜水果中克百威的检测量子点微球荧光免疫层析法

1范围

本文件规定了蔬菜水果中克百威的量子点微球荧光免疫层析快速检测方法。

本文件适用于辣椒、青菜、豇豆、芹菜、韭菜、黄瓜、苹果、柑橘和梨中克百威的快速检测。本方法检测克百威的检出限为0.004mg/kg，定量限为0.008mg/kg。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB23200.112食品安全国家标准植物源性食品中9种氨基甲酸酯类农药及其代谢物残留量的测定液相色谱-柱后衍生法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

本方法以量子点微球为荧光标记物，基于竞争抑制免疫层析技术原理，通过荧光免疫分析仪进行数据读取和分析，根据已设定的标准曲线计算样品中待测物质的含量，对蔬菜水果中的克百威进行定量检测。

5试剂和材料

除另有说明外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。

5.1乙腈（C2H3N）。

5.2磷酸氢二钾（K2HPO4）。

5.3磷酸二氢钾（KH2PO4）。

5.4试样提取液：准确称取5.6g磷酸氢二钾（5.2）、0.41g磷酸二氢钾（5.3），乙腈（5.1）100mL用水溶解并定容至1L。

5.5试样稀释液（0.01mol/L磷酸盐缓冲液）：准确称取5.6g磷酸氢二钾（5.2）、0.41g磷酸二氢钾（5.3），用水溶解并定容至1L。

6仪器和设备

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6.1分析天平：感量为0.01g。

6.2微量移液器：20μL～200μL、100μL～1000μL和1mL～10mL。

6.3旋涡振荡器：转速≥2500r/min。

6.4恒温孵育器：设定温度为37℃,误差不超过±1℃。

6.5荧光免疫分析仪：激发波长为365nm±5nm，发射波长为610nm±5nm。

6.6离心机：转速≥4000r/min。

6.7均质机：转速≥5000r/min。

6.8离心管：1.5mL和50mL。

6.9克百威量子点微球免疫层析包装盒：含量子点微球免疫层析试纸条和标准曲线内置卡（ID卡），ID卡内设对应批次标准曲线。

7试样制备

7.1分样和粉碎

取不少于100g具有代表性的蔬菜水果样品，充分均质混匀，均分成两份分别装入洁净容器作为试样和留样，密封，标记，留样置于-20°C避光保存。蔬菜水果测定部位按照GB2763的规定执行。

7.2试样前处理

7.2.1准确称取2g±0.1g试样于50mL离心管中。

7.2.2向上述离心管中加入试样提取剂3mL（5.4），封盖漩涡混匀2min。

7.2.3取1mL提取后上清液，4000rpm离心2min。

7.2.4取50μL离心后上清液加入700μL克百威试样稀释液（5.5），混匀后用于检测。注：不同厂家检测卡所用的样品前处理方法可能不同，应按照产品使用说明中规定方法进行操作。

8测定步骤

8.1测试前打开荧光免疫分析仪（6.5），确认包装盒中的ID卡与产品批号是否匹配，插入ID卡，在仪器测试界面点击“读卡/读项目”，界面出现“读取完成”，点击“确认”即可使用。

8.2将恒温孵育器（6.4）开机，待温度升至37℃即可使用。

8.3从密封包装袋中取出克百威量子点微球免疫层析试纸条，在30min内使用。

8.4将克百威量子点微球免疫层析试纸条平放，用微量移液器吸取90μL稀释后的待测液于克百威量子点微球免疫层析试纸条的加样孔（S）中，在恒温孵育器中37℃孵育反应10min。

8.5反应时间结束后立即将克百威量子点微球免疫层析试纸条插入荧光免疫分析仪中，点击仪器界面的“测试”，仪器会自动给出定量测试结果，15min内测试，结果有效。

注：不同厂家荧光免疫分析仪所用仪器界面设置可能不同，应按照仪器使用说明中规定方法进行。

9结果表述

样品中克百威的含量由荧光分析仪自动计算并显示，单位为毫克/千克（mg/kg）。

10其他

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10.1注意事项：使用前请仔细阅读说明书，仪器的具体操作详见仪器操作说明书；检测卡为一次性使用，检测时请勿触摸检测卡结果显示区，并避免阳光直射和电风扇