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栀子异戊烯基焦磷酸异构酶IPPI基因克隆与原核表达
【摘要】目的克隆栀子环烯醚萜生物合成途径中异戊烯基焦磷酸异构酶GjIPPI基因,并对其进行原核表达。方
法以栀子成熟果实中提取的总RNA为模板,通过反转录、DNA回收、载体构建等技术对异戊烯基焦磷酸异构酶
(isopentenyldiphosphateisomerase)cDNA进行克隆。将该基因片段与pLB零背景载体相连接,构建重组质粒,再将重组质粒进行双酶切,与双酶切过的载体pMAL-c5X相连接,构成重组质粒,再转化大肠杆菌表达菌株后进行诱导目的蛋白。通过采用变性聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS)的方法来检测蛋白的表达情况。结果
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