大学-师范类-化学专业-仪器分析学科-第三章高效液相色谱法.ppt

*正相normalphase反相reversephase*在凝胶色谱实验中,溶剂的作用原则上没有其他液相色谱重要。*正相normalphase反相reversephase*正相normalphase反相reversephase由于高效液相色谱中流动相是液体，它对组分有亲和力，并参与固定相对组分的竞争。因此，正确选择流动相直接影响组分的分离度。对流动相溶剂的要求是：由于高效液相色谱中流动相是液体，它对组分有亲和力，并参与固定相对组分的竞争。因此，正确选择流动相直接影响组分的分离度。对流动相溶剂的要求是：（1）溶剂对于待测样品，必须具有合适的极性和良好的选择性。（2）溶剂要与检测器匹配。对于紫外吸收检测器，应注意选用检测器波长比溶剂的紫外截止波长要长。所谓溶剂的紫外截止波长指当小于截止波长的辐射通过溶剂时，溶剂对此辐射产生强烈吸收，此时溶剂被看作是光学不透明的，它严重干扰组分的吸收测量。可以在网上搜索一下溶剂的紫外截止波长。对于折光率检测器，要求选择与组分折光率有较大差别的溶剂作流动相，以达最高灵敏度。（3）高纯度。由于高效液相灵敏度高，对流动相溶剂的纯度也要求高。不纯的溶剂会引起基线不稳，或产生“伪峰”。痕量杂质的存在，将使截止波长值增加50～IOOnm。（4）化学稳定性好。不能选与样品发生反应或聚合的溶剂。(5)低粘度。若使用高粘度溶剂，势必增高压力，不利于分离。常用的低粘度溶剂有丙酮、乙醇、乙晴等。但粘度过于低的溶剂也不宜采用，例戊烷、乙醚等，它们易在色谱柱或检测器内形成气泡，影响分离.*如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等*正相normalphase反相reversephase**2)光电二极管阵列检测器(photodiodearraydetector，PDAD)??也称快速扫描紫外可见分光检测器，是一种新型的光吸收式检测器。它采用光电二极管阵列作为检测元件，构成多通道并行工作，同时检测由光栅分光，再入射到阵列式接收器上的全部波长的光信号，然后对二极管阵列快速扫描采集数据，得到吸收值(A)是保留时间(tR)和波长(l)函数的三维色谱光谱图。由此可及时观察与每一组分的色谱图相应的光谱数据，从而迅速决定具有最佳选择性和灵敏度的波长。单光束二极管阵列检测器，光源发出的光先通过检测池，透射光由全息光栅色散成多色光，射到阵列元件上，使所有波长的光在接收器上同时被检测。阵列式接收器上的光信号学的方法快速扫描提取出来，每幅图象仅需要10ms，远远超过色谱流出峰的速度，因此可随峰扫描。?*工作原理雾化：液体流动相在载气压力的作用下在雾化室内转变成细小的液滴，从而使溶剂更易于蒸发。液滴的大小和均匀性是保证检测器的灵敏度和重复性的重要因素。UM-3000蒸发光散射检测器，通过对气压和温度的精确控制，确保在雾化室内形成一个较窄的液滴尺寸分布，使液滴蒸发所需要的温度大大降低。蒸发：载气把液滴从雾化室运送到漂移管进行蒸发。在漂移管中，溶剂被除去，留下微粒或纯溶质的小滴。UM3000蒸发光散射检测器采用低温蒸发模式，维持了颗粒的均匀性，对半挥发性物质和热敏性化合物同样具有较好的灵敏度。检测：光源采用650nm激光，溶质颗粒从漂移管出来后进入光检测池，并穿过激光光束。被溶质颗粒散射的光通过光电倍增管进行收集。溶质颗粒在进入光检测池时被辅助载气所包封，避免溶质在检测池内的分散和沉淀在壁上，极大增强了检测灵敏度并极大地降低了检测池表面的污染。

*表征物质分子扩散能力的物理量，受系统的温度、压力和混合物中组分浓度的影响*使用小粒度固定相，填料规则排布并紧密填充（Cm下降）使用Dm大的流动相，可改善传质，提高柱效，减小峰宽。*由上式可看出：固定相微孔小而深，传质慢峰扩展就大。固定相粒度愈小，孔径越大，传质效率越好，柱效就越高。滞留区与固定相结构有关，改进固定相就成为提高液相色谱柱效一个重要问题。.*使用小粒度固定相，填料规则排布并紧密填充（Cm下降）使用Dm大的流动相，可改善传质，提高柱效，减小峰宽。*液相色谱H-u曲线与其气相色谱不同，是一段斜率不大的直线，只是因为分子扩散相对H值的影响可以忽略不计。在液相色谱中，使用较高流速，柱效不会明显下降，有利于实现快速分离。**由于最初用涂渍法得到的固定相，由于使用溶剂流动相，固定相与流动相理论上应互不相溶，否则固定液容易流失液一液分配色谱法与气一液色谱法的比较：相似处：分离顺序决定于分配系数的大小，K大的组分保留值大。不同处：GC流动相性质对K影响不大，而LC中流动相种类对K影响较大。*此处涉及固