DB33T 2268-2020 猫细小病毒PCR检测方法.pdfVIP

ICS11.220

B41

DB33

浙江省地方标准

DB33/T2268—2020

猫细小病毒PCR检测方法

PCRdetectiontechniqueforfelinepanleukopeniavirus

2020-06-30发布2020-07-30实施

浙江省市场监督管理局发布

DB33/T2268—2020

前言

本标准按照GB/T1.1—2009的规定编写。

本标准由浙江省农业农村厅提出。

本标准由浙江省畜牧兽医和饲料标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：浙江省动物疫病预防控制中心。

本标准主要起草人：张红丽、徐辉、赵灵燕、周彩琴、吴贇竑、黄靖、吕见涛、刘爱军、刘霞、

吴雪军、孙冰冰、章杭建。

I

DB33/T2268—2020

猫细小病毒PCR检测方法

1范围

本标准规定了猫细小病毒PCR（polymerasechainreaction）的实验条件、操作步骤、结果判定。

本标准适用于猫细小病毒（猫泛白细胞减少症病毒）的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

猫细小病毒Felinepanleukopeniavirus，FPLV

属细小病毒科，细小病毒亚科，牛犬细小病毒属成员，又称猫泛白细胞减少症病毒、猫传染性胃肠

炎病毒或猫瘟病毒。

4实验条件

4.1试剂

4.1.1要求

除另有规定外，所用试剂为分析纯或生化试剂，水为符合GB/T6682要求的灭菌双蒸水或超纯水。

4.1.2试剂

4.1.2.1核糖核酸酶（20mg/mL）。

4.1.2.210%十二烷基磺酸钠溶液。

4.1.2.310mg/mL蛋白酶K。

4.1.2.4Tris-盐酸饱和酚（pH7.6）。

4.1.2.5酚-氯仿-异戊醇混合液（25：24：1）：在一灭菌棕色瓶中按25：24：1比例分别加入酚、氯

仿、异戊醇。

4.1.2.63mol/L乙酸钠（pH5.4）。

4.1.2.7琼脂糖。

1

DB33/T2268—2020

4.1.2.810μg/μL溴化乙锭（ethidiumbromide，EB）：溴化乙锭20mg、加灭菌双蒸水至20mL充

分溶解混匀而成。

4.1.2.950×TAE缓冲液：羟基甲基氨基甲烷（Tris）242g、冰乙酸57.1mL、0.5mol/L乙二铵四乙

酸二钠溶液（pH8.0）100mL，加灭菌双蒸水至1000mL充分混匀。

4.1.2.10加样缓冲液：聚蔗糖25g、溴酚蓝0.1g、二甲苯青0.1g，加灭菌双蒸水至100mL充分溶

解混匀而成。

4.1.2.112.5mmoldNTPs（deoxyribonucleosidetriphosphates，脱氧核糖核苷三磷酸）。

4.1.2.1210×PCRBuffer。