微生物药物的发酵生产技术.pptVIP

壹斜面菌种制备贰短期存放叁斜面菌种要求丰富的孢子和营养菌体细胞肆斜面应软硬适中，光滑，表面无游离水，无污染，斜面长不超过试管2/3。伍制备好的斜面菌种要求无污染，外观生长均匀，孢子或菌体丰满，无杂菌杂色等。实验室种子制备米孢子的制备01010203040506质量要求：无污染，孢子数足，发芽率高，生产能力稳定。影响米孢子质量的因素：米的质量——用优质品种、新米；米的湿度——以灭菌后不结块为准；营养液成分0203040506大米/小米孢子悬液摇匀培养米孢子010203分装灭菌斜面孢子或米孢子调pH营养液米孢子的制备工艺流程水洗沥干STEP4STEP3STEP2STEP1摇瓶种子的制备摇瓶种子提供的通常是丰富的营养菌体细胞。要求无污染、生产力高、菌体浓度高、处于生长阶段。要求培养基组成丰富而均衡，控制液体装瓶量，一般：40-50ml/250ml，60-80ml/500ml，80-100ml/750ml种子罐的种子制备以生长营养菌体为目的，细菌发酵一般采用二级种子发酵，即经过斜面菌种、一级摇瓶种子、二级种子罐培养、大罐发酵的过程。种子罐的级数应随产物的品种及生产规模而定，也随工艺条件的改变做适当调整。放线菌常用三级扩大的方法培养种子。（3）种子罐种子的制备1生产现场，一级种子罐用火圈法或压力差法接种，二、三、四级种子罐用压力差法接种。2一般种子罐之间的接种量在5%-10%，种子罐到发酵罐之间的接种量可以控制在20%-30%。3种子罐的控制内容包括细胞代谢状态、发酵液中的残糖和氨氮含量、pH变化、细胞的呼吸活性等。4为了菌体细胞进入发酵罐后能很快的适应发酵培养基条件，应该在最后一级种子罐配料上加入适当的发酵培养基条件，如pH、消泡剂。微生物药物是微生物的次级代谢产物，是在微生物完成快速生长和某些营养被利用殆尽后才开始产生的。1适宜于次级代谢产物合成的发酵条件是菌体细胞生长的限制条件，但次级代谢产物的合成水平又决定于菌体细胞生长状态。2在微生物药物生产发酵中如何调整培养基组成是影响药物产量的决定性因素。33、药物生产菌的生长和产物合成12药物产生菌的营养需求和培养基配制培养基成分包括碳源、氮源、无机盐、特殊生长因子、水等五大类物质。12培养基配制中常用的组分营养性质可用组分碳源糖类：己糖（葡萄糖），戊糖（木糖），双糖（蔗糖、麦芽糖、乳糖），多糖（淀粉、糊精、菊糖、纤维素）醇类：甲醇，乙醇，多元醇羧酸：醋酸，不饱和脂肪酸碳氢化合物：甲烷，正丁烷，石蜡油氮源无机氮源：铵盐，硝酸盐有机氮源：尿素，动植物粉类，玉米浆，酵母和蛋白水解液无机盐磷（KH2PO4），硫（硫酸盐）其他：常量元素和微量元素其他成分前体（苯乙酸→青霉素，应注意对细胞的毒性）促进/诱导剂（硫氰化苄→四环素）消泡剂（植物油脂和动物油脂，聚醚类和硅油类合成消泡剂）酶制剂等在发酵培养基设计中，一般先用合成成分鉴别特殊需要，再转为天然培养基，以扩大生产。在发酵培养基成分选择是，除传统营养外，可选用各种农副产品、工业副产品、废料等。开发天然培养基时，应考虑：新选微生物及其工艺的特殊营养需求；为保持培养基成分稳定，改善储藏条件和加工条件；原料的性质及配制、灭菌、发酵条件对产物提取的影响；培养基价格。影响微生物生长和产物合成的环境因子温度压力和溶氧剪切力pH水活性基质和产物的浓度微生物药物发酵生产不同时期对基质的要求营养生长期生产期碳源容易利用并保持一定浓度缓慢利用的碳源或复合碳源氮源足量的有机氮源，或补充少量无机氮源适量补充无机氮源磷必不可少限制游离磷酸盐微量元素必不可少适量限制前体不需要添加（3）微生物次级代谢产物发酵生产的优化和控制代谢调控碳源阻遏能被微生物快速利用、促进产生菌快速生长的碳源对次级代谢产物生物合成都表现出抑制作用——葡萄糖效应。氮源调控缓效氮源可以防止和减弱氮代谢物的阻遏作用，有利于次级代谢产物的合成；速效氮源能促进菌体的生长，却不利于次级代谢产物的合成。磷酸盐控制促进初级代谢、抑制次级代谢阻遏次级代谢产物合成中某些关键酶的合成抑制次级代谢产物合成中某些关键酶的活性增加菌体能荷，促进初级代谢自控因子和多效因子产物反馈抑制010203条件优化过程的三个阶段摇瓶发酵小规模发酵实验工艺放大4、药物的发酵技术搅拌式发酵罐（2）补料分批发酵也称半连续发酵，是指在分批发酵过程中，间歇的补加有限制性营养物的一种与分批发酵相似的发酵方法。