微生物遗传变异与菌种保藏增加内容.ppt

（3）单孢子或单细胞悬液的制备（3）单孢子或单细胞悬液的制备1）必要性：单细胞可均匀地接触诱变剂，避免出现不纯的菌落——菌种退化。2）制备：物理诱变剂——生理盐水（0.85%NaCl)化学诱变剂——缓冲液。3）方法：三角瓶内加φ0.5cm玻璃珠打散10-15min;加０.3%吐温80（表面活性剂），用无菌脱脂棉过滤。4）浓度：细菌、放线菌108个/ml霉菌、酵母菌106个/ml（4）设计和采用效率高的筛选方案和方法1）初筛：平板上做定性、半定量的测定，观察突变株的生理效应范围。方法梯度平板法（抗性菌株）纸片法（抗性菌株）透明圈法（淀粉酶产生菌株等）变色圈法（氨基酸生产菌株）2）复筛：（见P250）较精确的生物化学分析方法—做摇瓶测定01营养缺陷型的筛选02概念筛选方法三种遗传型个体筛选用的培养基（一）概念经诱变产生的一些合成能力出现缺陷，而必须在培养基内加入相应有机养分才能正常生长的变异菌株。如：lys-;bio-;（1）营养缺陷型（auxotroph）：自然界分离到的任何微生物，在其发生营养缺陷突变前的原始菌株，为该微生物的野生型。如：lys+;bio+;（2）野生型(wildtype)：指auxo突变菌株回复突变或重组后产生的菌株，与野生型的表型相同。（3）原养型(prototroph)：贰壹叁1.三种遗传型个体满足野生型菌株营养要求最低成分的组合。1）基本培养基（minimalmedium,MM）[-]：满足一切auxo生长的天然或半组合培养基。2）完全培养基（completemedium,CM）[+]：在MM中有针对性地加入一或几种营养成分以满足相应auxo生长的组合培养基。3）补充培养基（supplementedmedium,SM）[x]：2、筛选用的培养基第八章微生物遗传变异

与菌种保藏(增加内容)1本章内容：3第二节基因突变及修复2第一节遗传的物质基础4第三节基因重组5第四节微生物诱变育种6第四节菌种的衰退、复壮及保藏第一节基因突变与诱变育种一、基因突变二、突变与育种三、营养缺陷型的筛选0102基因突变突变类型突变的特点基因突变自发性及不对应性证明基因突变的机制DNA的损伤及修复01形态突变型菌落形态营养缺陷型02生化突变型抗性突变型抗原性突变（包括细胞内部、表面成分的改变）细胞形态（一）突变类型3、致死性突变型（合成关键性酶的基因发生了突变，则表现出致死突变）条件致死突变型——如突变为温度敏感型突变（37℃死，25℃活）4、其它突变型毒力突变、糖发酵突变、产量、产品突变等。可逆性：有回复突变。诱变性：诱变剂可提高突变率10~105X。独立性：一个基因的突变对其它基因突变无影响。自发性：非人为的诱变因素下发生。稳定性：突变性状稳定、可遗传。稀有性：生物自发突变率为10-6～10-12。规律性：某一特定性的突变率具规律性。非对应性：环境与变异无对应性。（二）突变的特点（三）基因突变自发性及不对应性的证明

（自学）自发突变：没有人工诱变因素的参与，生物体自然突变。彷徨试验：涂布试验：平板影印(Replicaplating)培养试验：彷徨试验01抗性细胞的出现，是在接触噬菌体之前02喷上噬菌体，仅起淘汰野生型和鉴别抗性株作用；03于甲方高度彷徨，说明突变是随机的。平板影印培养试验涂布敏感菌5×104个共12个平板5×104个菌落5000个细菌/菌落喷入T1保温重新涂布后喷入T1保温6个平板共353个菌落6个平板共28个菌落突变与噬菌体无关；涂布使抗性菌株均匀分布；抗性突变可在任何时间发生，与噬菌体存在无关。以上实验用统计学原理间接证明。影印培养无药培养基含药