抗生素药物的分析.ppt

取3个平皿，每个放6个小管。在间隔的3个小管内加入抗生素标准品的中心浓度(Co),另3个小管内加入估计浓度相当于Co的检品溶液。测量出fk,从标准曲线中计算出检品的浓度，在换算出每毫克的单位数。检品的效价检定：010201将抗生素的标准品及检品各稀释成有一定比例的二种剂量（2：1或4：1），即高剂量和低剂量，在同一平板上进行对比，根据所产生抑菌圈大小来计算检品效价的方法。SH:为抗生素标准品高剂量（dS2）所致的抑菌圈直径0101020304SL：为抗生素标准品低剂量(dS1)所致的抑菌圈直径UH：为抗生素检品高剂量(dT2)所致的抑菌圈直径UL：为抗生素检品低剂量(dT1)所致的抑菌圈直径02030401高剂量抑菌圈直径应为20~24nm，个别可为18~24mm，高剂量与低剂量抑菌圈直径之差应大于或等于2mm。02底层琼脂20ml，上层5ml，每一检品所用平板不少于4个。03等距安置小钢管4个，相对角为同一物质。04θ为100±10%（更精确要求100±5%）05标准品与检品同质要求：应用高、中、低三种剂量，在同一实验条件下比较标准品及检品溶液的抑菌圈大小，以求得检品效价的方法。:为抗生素标准品中剂量（dS2）所致的抑菌圈直径S:为抗生素标准品低剂量（dS1）所致的抑菌圈直径U：为抗生素检品高剂量(dT3)所致的抑菌圈直径U：为抗生素检品中剂量(dT2)所致的抑菌圈直径U:为抗生素标准品高剂量（dS3）所致的抑菌圈直径S02010305060401标准品中剂量抑菌圈直径15~18mm02高、中、低剂距为1:0.803每一检品不得少于6个平皿04每板上等距安放小钢管6个05θ:100±10%（100%±5%）要求：三影响抗生素效价管碟法测定结果的因素及其控制（一）影响抑菌圈形状的因素与控制1．稀释抗生素用的缓冲液的PH值、盐浓度的影响.pH值低或含盐浓度高，就会不显抑菌圈或呈卵圆形抑菌圈。这是因为抗生素溶液的盐浓度高或pH值过低，可能改变抗生素分子的解离状态，影响了抗生素对试验菌抑制作用。2．制各琼脂培养基菌层，加菌时培养基温度的影响3．测试用的器材洗净度的影响4双碟培养温度的影响5其他操作的影响（二）影响抑菌圈边缘清晰度的因素与控制1试验菌长时间放置．菌群中的一些菌株生理特性有所变化，或是生长速度改变，或对抗生素的敏感度有所变化，往往出现双圈，抑菌圈的边缘不清。在检定时菌层培养基中的菌量影响抑菌圈，菌层培养基中的菌量过低，抑菌圈边缘模糊不清，菌量过高、使抑菌圈太小并且影响试验菌灵敏度。因此，在正式检测之前，找出最适菌量。2培养基的原材料品种与质量，生测用培养基用的原材料的选择很重要。3调节培养基的pH值或增加适量的盐浓度可使抑菌圈清晰.4．不适当延长双碟的培养时间，使抑菌圈边缘不清。操作分为八步：1试验菌的纯化与悬液的制备2缓冲液、灭菌水与培养基的制备3标准品、供试品的称量、溶解与稀释4双碟的制备及放管5滴加药液6恒温培养7测量抑菌圈直径或面积8计算操作流程：比浊法管碟法优点1、快速1、结果较稳定2、客观、精确2、大批量3、无扩散影响缺点1、对样品洁净度要求高1、扩散因素影响较大2、实验要求较严2、时间长（2天)3、操作繁琐,人为因素的干扰何谓过敏反应:第八章抗生素药物的分析第一节概述抗生素的概念：具有抑制或杀灭微生物的一类物质。抗生素的特征：生物体在生命活动过程中合成的次级代谢产物。性质不稳定，易降解、聚合纯度一般较低临床上会引起不良反应临床应用广泛，影响大抗生素药品质量研究的项目：性状及鉴别试验，含量测定或效价测定，酸碱度测定，澄明度，水分或干燥失重，安全试验（异常毒性），热原，降压物质，无菌。其他检查：组分、杂质、晶型、比旋度、灰分、重金属、熔点等。抗生素药品分析常用的方法：物理方法:旋光法、紫外、红外、色谱等化学方法（专属性不强）：功能团反应，鉴别和含量的测定。容量分析法：酸碱滴定（青霉素含量测定）和碘量法。生物学方法：酶反应、微生物法测定效价微生物检定法定义：是利用微生物发育时对某些物质的特殊依赖性，按这些物质对微生物生长的影响，对他们作出定量鉴定的方法。微生物检定法可分为三类：稀释法（dilutemethod）、比浊法（turbidcomparemethod）、琼脂扩散法（diffusemethod）。与化学方法相比：优点：1、原理与医疗要求