抗生素产生菌的菌种筛选及优化.ppt

单倍体细胞具α及ε2两种交配型。两种交配型细胞经其细胞壁上特定的凝聚因子诱导而进行交配，恢复为双倍体；同一交配型细胞之间，则因细胞壁上凝集因子的存在而不能进行交配。在生活过程中，酵母细胞还可以形成三倍体、四倍体、多倍体或非整倍体细胞。酵母杂交01一般而言，杂交育种运用了酵母的单双倍生活周期，将不同基因型和相对的交配型的单倍体细胞经诱导杂交而形成二倍体细胞，经筛选便可获得新的遗传性状。02酵母的杂交方法有孢子杂交法、群体交配法、单倍体细胞杂交法和罕见交配法。就啤酒酵母而言，运用罕见交配法更易获得结果。03原生质体育种技术主要有原生质体融合、原生质体转化技术，此外尚有原生质体诱变育种等。原生质休融合育种是基因重组的一种重要方法。原生质体融合作为一种新的基因重组手段是1978年第三届国际工业微生物遗传学讨论会上提出来的。第八节原生质体育种杂交频率较高：细胞壁去除后在高渗条件下形成类似于球形的原生质体。01受接合型或致育型的限制较小：二亲株中任何一株都可能起受体或供体的作用，因此有利于不同种属间微生物的杂交。02遗传物质传递更为完整：原生质体融合是二亲株的细胞质和细胞核进行类似的合二为一的过程。03一、原生质体融合育种的特点01存在着两株以上亲株同时参与融合形成融合子的可能性。03提高菌株产量的潜力较大。02（五有可能采用产量性状较高的菌株作融合亲株。04有助于建立工业微生物转化体系。标记菌株的筛选和稳定性验证。01等量原生质体加聚乙二醇促进融合。03选择性培养基上划线生长，分离验证，挑取融合子进一步试验、保藏。05原生质体制备。02涂布于再生培养基，再生出菌落。04生产性能筛选。06二、原生质体融合育种步骤采用抗药性菌株除可作标记外，在实验室中还可排除杂菌污染的干扰。为的是确证融合的成功，可以采用多标记菌种。获得标记菌种的方法是采用常规诱变育种，筛选出营养缺陷型或／和抗药性菌株。这里最重要的是标记必须稳定。标记菌种的选择三、原生质体融合育种的要点在放线菌和细菌中，制备原生质体主要采用溶菌酶；酵母和霉菌一般可用蜗牛酶或纤维素酶等。02原生质体的制备主要是在高渗压溶液中加入细胞壁分解酶，将细胞壁分离剥离，结果剩下由原生质膜包住的类似球状的细胞，它保持原细胞的一切活性。01(二)原生质体的制备010203为了使细胞易于原生质体化，一般选择增殖期的菌体。2．菌体的培养时间为了使酶作用的效果好一些，可将菌作一些前处理。如细菌加入亚抑制剂量的青霉素。1．菌体的前处理对于不同种属的微生物，不仅对酶的种类要求不同，就是对酶的浓度也有差异。另外，最佳酶浓度还随不同的生长期的菌体而变化。3．酶浓度影响原生质体制备的因素酶处理温度破壁时的pH值渗透压稳定剂等渗透压在原生质体制备中，不仅起到保护原生质体免于膨裂，而且还有助于酶和底物的结合，渗透压稳定剂多采用甘露醇，山梨醇，蔗糖等有机物和KCl和NaCl等无机物。第九节筛选新的代谢产物从自然界分离新的微生物菌株，或采用新的检阅方法筛选新的代谢产物。1对已知微生物的代谢产物进行化学修饰。2利用微生物转化改造代谢产物的结构。(4)通过原生质体融合获得新的代谢产物。3DNA重组技术。4一、开发新的代谢产物的途径四、遗传转化转化是指受体细胞直接摄取供体细胞游离的DNA片段，将其同源部分进行碱基配对，组合到自己的基因中，从而获得供体细胞的某些遗传性状。操作步骤：质粒DNA转化感受态大肠杆菌从琼脂平板上挑取新鲜菌落接入10ml肉汤培养基中，37℃培养过夜。取0.5ml培养物接入50ml肉汤中，无菌添加0.4ml2.5mol／LMgCl2，于37℃振荡培养。将o.1mol／LCaCl2溶液、试管及吸管在冰浴中冷却。当培养物OD600在o.5～o.8左右时，开始收获细胞(大约需2～2.5h)．01将培养物置冰浴中冷却10min。02取10ml培养物置2个冷离心管中弃去上清液。03加入1ml0.1mol／LCaCl2，再加0.9mlCaCl2，置冰浴中放置20min。3000r／min离心10min，弃去上清液．加入1ml0.1mol／LCaCl2，重新悬浮细胞，置冰浴中保存。加入1～20μl待转化质粒DNA溶液。在冰上放置20min，在37℃处理2min。再插入冰中．加入0.9m1肉汤37℃静置培养90min。01以不同的量涂布选择培养基平板。02于37℃培养过夜。鉴定转化菌落。03常用的遗传转化系统自然系统人工诱导（完整细胞）二价阳离子系统：Ca2+，Ca2++Mg2