微生物检验技术.ppt

灭菌和消毒*要灭菌后的器皿仍保持无菌状态，需在灭菌前进行包扎。1培养皿：洗净的培养皿烘干后每10套（或根据需要而定）叠在一起，用牢固的纸卷成一筒，或装入特制的铁桶中，然后进行灭菌。2吸管：每根独立包好后，再放进去高压锅灭菌；如果是放在不锈钢的筒子里面的话，可以不用独立包，但是取的时候一定要注意不要污染其他的移液管；3试管和三角瓶：试管和三角瓶都需要做合适的棉塞，棉塞可起过滤作用，避免空气中的微生物进入容器。制作棉塞时，要求棉花紧贴玻璃壁，没有皱纹和缝隙，松紧适宜。过紧易挤破管口和不易塞入；过松易掉落和污染。棉塞的长度不小于管口直径的2倍，约2/3塞进管口。4玻璃器皿：包好后摆入电热烘箱进行干灭时，相互间要留有一定的空隙，以便空气流通。灭好后待烘箱内温度自然降温到60℃以下后，再开门取出玻璃器皿，避免由于温度突然下降而引起玻璃器皿碎裂。5高压蒸汽灭菌操作流程灭菌和消毒*高压蒸汽灭菌操作流程关好排水阀门，放入纯净水或蒸馏水至标度。注意水量一定要加足，否则容易造成事故。将须要灭菌的器材、培养基等装入灭菌锅中，加盖密封。同时旋紧相对的两个螺旋，以达到平衡旋紧，否则易造成漏气，达不到彻底灭菌的目的。通电加温，打开排气活门，排尽锅内的空气。通常当压力表指针升至5磅或0.05MPa时，打开排气活门放气，待压力表指针降至零点一小段时间后，再关闭活门。即活门冲出的全部是蒸汽时则表示彻底。恒温灭菌:0.1MPa或15磅压力保持20～30分钟。降温：自然降温或打开活门排汽降温。注意勿使排气过快，一般从排气到打开锅盖以10分钟左右为好。当锅内蒸汽完全排尽时即压力表指针降到零时，要立即打开锅盖。取出灭菌物品：当锅内温度下降到60℃左右时取器材或培养基。长时间不用时，应将高压灭菌器内的剩余水排出。验证灭菌效果。把灭菌培养基放入25℃温箱中，培养48小时观察灭菌效果。48小时后不见杂菌生出，便证明培养基已达到灭菌目的，可以使用。高压蒸汽灭菌注意事项*灭菌时要排净高压锅中的空气。空气不排净，压力达到预定值时，温度仍为100℃。01为了避免培养基营养成分受到破坏，在灭菌的过程中应严格把握灭菌的温度与时间，不能随意地提高灭菌的温度或延长灭菌时间。02由于高压灭菌会导致培养基的体积和浓度有所变化，在配制培养基时，每100mL培养基可适量增加5mL左右的蒸馏水。03预防培养基在加热溶解、灭菌煮沸等过程中导致水分挥发、损失而使培养基的浓度过大或体积减少。04无菌操作*GLP（良好实验室规范）工作区域缓冲间不是储藏室；无菌操作室、超净台禁止存放堆积杂物；缓冲间和无菌室的门错开开启，减少外界空气侵入；紫外灯消毒台面、地面，不能同时开启鼓风；门窗关闭，避免扬尘；用75%乙醇消毒台面；使用霉菌的操作台最好是专用，防止污染的操作。超净工作台要满足的条件：每周一次做空气沉降菌实验，应满足细菌≤2个/平皿/30min，霉菌、酵母菌：0个/平皿/30min。无菌操作*1进入无菌室换专用的实验服、帽、鞋，戴好口罩热水皂液洗手；75%乙醇消毒手和手臂员2靠近火焰上半球操作所有器具接触培养物的部分必须无菌注意避免微生物污染操作培养*倒置培养适当的温度细菌：36℃霉菌、酵母：28℃大肠菌群：36℃注意：培养箱的温度校正保持一定的湿度培养箱中置一杯水定时查看，并做记录计数*计数场所洁净，明亮保持培养皿的底部清洁可借助放大镜观察有霉菌生长的平皿不可打开皿盖每块平皿上最佳数量为30~300若无菌生长，则记录为1若300，则可估读数饮料微生物检测方法*01膜过滤法02标准平板计数法03棉拭法04显微直接计数法05食品卫生微生物检验国标06嗜酸耐热菌检测07致病菌检测08企标要求膜过滤法*使用范围：可以过滤的样品样品含菌量相对较少，一般≤300cfu/ml优点：可富集微生物，更灵敏。过滤设备消毒灭菌：121℃，15min一次性无菌滤膜（直径47mm）0.45μm：细菌总数和大肠杆菌0.8μm：霉菌和酵母膜过滤法*抽滤系统真空泵—缓冲瓶—集液瓶—三联（六联）抽滤器抽滤液体抽完后，空抽时间不超过30秒可用20ml水冲洗，不可用洗瓶冲。?培养在吸收垫上培养在琼脂平板上?计数直接显微计数培养后计数标准平板计数法*在无菌培养皿中加1ml样品在培养皿中倒入15-20ml培养基，注意：瓶口不要触及皿盖小心混匀样品和培养基水平放置凝固后，倒置培养计数空白对照步骤培养基准备在沸水中融化，置47±2℃水浴中适用范围：难过