鳞翅目昆虫CYP6AB亚家族P450基因的进化及功能研究.pdf

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摘要I

ABSTRACTIII

第一章文献综述1

1细胞色素P450简介1

1.1细胞色素P450的命名1

1.2细胞色素P450的分类2

1.2.1根据系统发育分析关系分类2

1.2.2根据细胞定位分类3

1.2.3根据功能分类4

1.3细胞色素P450结构与功能4

1.3.1细胞色素P450蛋白结构特点4

1.3.2细胞色素P450结构与功能的关系5

1.3.3细胞色素P450底物催化机制6

2昆虫细胞色素P450基因的进化与功能研究7

2.1昆虫细胞色素P450的起源与多样性7

2.2昆虫细胞色素P450的进化8

2.2.1多基因家族进化的几种模型9

2.2.2昆虫细胞色素P450基因进化模型的研究进展10

2.3昆虫细胞色素P450基因的功能研究11

2.3.1昆虫细胞色素P450与生理发育的关系12

2.3.2昆虫细胞色素P450介导的植物毒素解毒12

2.3.3昆虫细胞色素P450介导的抗药性13

2.4昆虫细胞色素P450基因功能分化介导的环境适应15

2.4.1P450基因簇在昆虫-寄主植物协同进化过程中的关键作用15

2.4.2鳞翅目昆虫CYP6B功能分化介导的寄主选择16

2.4.3膜翅目昆虫P450基因扩增导致的杀虫剂耐药性17

3昆虫细胞色素P450基因的功能验证18

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鳞翅目昆虫CYP6AB亚家族P450基因的进化及功能研究

3.1昆虫细胞色素P450功能的离体验证方法18

3.1.1大肠杆菌表达系统18

3.1.2昆虫细胞杆状病毒表达系统19

3.1.3酵母表达系统19

3.1.4转基因果蝇表达系统20

3.2昆虫细胞色素P450功能的活体验证方法20

3.2.1RNA干扰技术20

3.2.2基因编辑技术21

3.2.3转基因昆虫技术21

4本研究的目的和意义22

第二章CYP6AB亚家族P450基因的挖掘和系统发育分析25

1材料与方法25

1.1鳞翅目昆虫基因组数据来源25

1.2CYP6AB亚家族P450基因序列挖掘26

1.3CYP6AB亚家族P450基因系统发育分析27

1.4CYP6AB亚家族P450基因进化选择压力分析27

2结果与分析28

2.1鳞翅目昆虫CYP6AB亚家族P450的基因分析28

2.2鳞翅目昆虫CYP6AB亚家族P450的系统发育30

2.3鳞翅目昆虫CYP6AB亚家族P450基因的进化选择压力31

3讨论32

第三章鳞翅目昆虫CYP6AB亚家族P450基因的功能表达及功能分化35

1材料与方法35

1.1供试昆虫35

1.2主要试剂36

1.3主要仪器设备37

1.4RNA提取37

1.5反转录为cDNA37

1.6P450基因克隆、表达载体以及重组Bacmid的构建38

1.6.1引物设计38

1.6.2克隆目的基因38

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