水稻胚乳发育关键基因BLOS2的图位克隆和功能分析.pdfVIP

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ABSTRACTIII

缩略语V

第一章文献综述1

1水稻种子的结构1

2水稻淀粉的合成2

2.1淀粉形态2

2.2淀粉的组成成分3

2.3淀粉的生物合成3

2.4水稻胚乳淀粉生物合成模型4

2.5影响淀粉合成的基因5

3水稻贮藏蛋白的合成6

3.1贮藏蛋白的种类6

3.2贮藏蛋白的合成6

3.3贮藏蛋白合成相关基因7

3.4贮藏蛋白在内质网的加工及相关基因调控8

3.5贮藏蛋白运输途径调控的相关基因10

4BLOC-1复合体的功能11

4.1BLOC-1在酵母中的组成及其复合体功能11

4.2BLOC-1在斑马鱼中的功能12

4.3BLOC-1在黑腹果蝇中的组成及功能12

4.4BLOC-1在家蚕中的功能12

4.5BLOC-1在哺乳动物中的组成和功能13

4.6BLOC-1在拟南芥中的功能14

5BORC复合体在He-La中的组成及其功能15

6本研究的目的及意义15

第二章材料与方法17

1材料种植17

2种子农艺性状调查17

3籽粒生理生化指标的测定17

4成熟种子横切面扫描电镜17

i

水稻胚乳发育关键基因BLOS2的图位克隆和功能分析

5发育中胚乳的半薄切片制备17

5.1半薄切片固定液配制17

5.2半薄切片样品制备与显微镜观察18

6突变体基因的定位18

7生物信息学分析19

8RNA的提取与Real-timequantitivePCR19

8.1RNA提取19

8.2逆转录反应19

8.3Real-timequantitivePCRRT-qPCR19

（）

9亚细胞定位20

10种子蛋白提取及Westernblot检测20

10.1水稻种子总蛋白提取20

10.2SDS20

10.3Western-blot21

11酵母双杂交实验21

12烟草瞬时表达实验21

第三章y23-D基因克隆与功能研究22

1结果与分析22

1.1y23-D突变体的表型分析22

1.2野生型和y23-D突变体种子中总淀粉、总蛋白和ABA含量23

1.3y23-D突变体中淀粉体和蛋白体发育异常24

1.4OsBLOS2基因的遗传分析与图位克隆26

1.5OsBLOS2同源蛋白的进化树及突变位点的保守性分析28

1.6BLOS2的表达模式分析和亚细胞定位29

1.7BLOS2影响胚乳中贮藏物质合成相关基因的表达和蛋白积累30

1.8OsBLOS2与BLOC-1