调控大豆CLCs基因的转录因子鉴定及其参与盐胁迫适应的生理功能研究.pdfVIP

目录

摘要I

ABSTRACTV

缩略语IX

第一章文献综述1

1植物耐盐性研究进展1

1.1土壤盐渍化现状及对植物生长的影响1

1.2植物缓解盐害的生理生化机制研究进展2

1.2.1渗透调节物质的积累2

1.2.2离子稳态的维持3

1.2.3抗氧化调节4

2氯离子毒害及氯离子通道基因的功能研究4

3转录因子在盐胁迫中的研究进展7

4大豆耐盐相关基因研究进展9

5本研究的目的和意义12

第二章大豆CLCs上游转录调控因子预测和鉴定13

1材料与方法14

1.1实验材料14

1.1.1植物材料14

1.1.2载体和菌株14

1.1.3主要仪器设备14

1.1.4本章所用引物合成和片段测序14

1.2实验方法15

1.2.1CLC家族成员的生物信息分析15

1.2.2大豆CLCs基因表达水平分析15

1.2.3可能调控CLCs基因的转录因子预测16

1.2.4基因克隆和载体构建17

1.2.5酵母单杂交分析19

1.2.6烟草瞬时表达分析和GUS染色21

2结果和分析22

2.1大豆和其他物种CLC蛋白的系统进化分析22

2.2大豆CLC家族蛋白的结构预测23

2.3大豆CLC基因启动子顺式作用元件统计24

2.4大豆CLCs基因的表达水平分析25

2.5大豆CLCs基因启动子克隆及上游转录因子预测和筛选鉴定27

2.6烟草瞬时表达检测转录因子与启动子的互作34

3讨论37

第三章GmCLC1上游转录因子GmbHLH3参与耐盐调控的生理和分子机制研究

39

1材料与方法40

1.1实验材料40

1.1.1植物材料和生长条件40

1.1.2载体和菌株40

1.1.3本章所用引物合成和片段测序40

1.1.4主要仪器设备42

1.2实验方法42

1.2.1氨基酸序列多重比对和系统进化树构建42

1.2.2启动子顺式作用元件分析42

1.2.3总RNA提取和qRT-PCR分析42

1.2.4拟南芥GUS染色分析43

1.2.5转录因子转录激活活性分析43

1.2.6亚细胞定位分析43

1.2.7GmCLC1启动子G-box元件点突变44

1.2.8烟草叶片GUS染色及GUS活性分析44

1.2.9酵母单杂交分析45

1.2.10GmbHLH3蛋白原核表达及纯化45

1.2.11EMSA实验47

1.2.12大豆转基因发根组合植株的获得及耐盐性分析49

1.2.13转基因拟南芥的耐盐性分析50

1.2.14根癌农杆菌介导的大豆遗传转化体系及转基因鉴定51

2结果和分析53

2.1bHLH家族成员的序列比对和系统进化分析53

2.2GmbHLH3和GmCLC1基因的组织表达及GUS染色分析54

2.3GmbHLH3的转录激活活性56

2.4GmbHLH3蛋白的亚细胞定位57

2.5GmCLC1启动子上顺式作用元件分析57

2.6GmbHLH3结合GmCLC1启动子-550处的G-box元件调控基因表达59

2.7GmbHLH3正调控GmCLC1的表达增强大豆发根组合植株耐盐性61

2.8转GmbHLH3基因的拟南芥耐盐性增强65

2.9根癌农杆菌介导的大豆遗传转化体系构建70