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第九章免疫学实验技术概述血清学反应：体外发生的抗原抗体反应。第一节体液免疫的检测——血清学反应所有血清学反应类型的基本原理：抗原抗体反应的特异性。二、血清学反应的一般规律(一)特异性Ab只能与相应Ag特异结合。Ag表面常具有多个(多种)不同表位，所以免疫血清中也应含有相应多种特异性Ab。抗原与抗体的结合的特异性交叉抗原：不同的Ag物质之间存在相同的Ag表位时，称为交叉抗原。01交叉反应：又不同抗原制备的抗血清除与各自的相应Ag发生反应外，尚能与对方Ag发生反应。02通常两种Ag之间亲缘关系越近，交叉反应程度越高。03（二）交叉性抗原与抗体的结合的交叉性ABSTEP1STEP2STEP3所有血清学反应都毫无例外地是用已知Ag测未知Ab或用已知Ab测未知Ag。用已知测未知的依据：抗原抗体的反应是特异的。正确理解实验原理或进行试验设计的关键是搞清楚什么是已知，什么是未知，谁是抗原身份，谁是抗体身份，谁是身兼两职的。(三)用已知测未知试验与抑制试验许多血清学试验可以被相应的Ag／Ab所抑制，即抑制反应现象的出现，抑制试验可以验证反应的特异性；还可使一些不易被检测的Ag(如简单半Ag)或Ab(如单价Ab)，得以检出。结合力与离解力1Ag，Ab的结合为弱能量的非共价健结合，其结合力决定于Ag表位与Ab的结合点之间所形成的非共价健的数量，性质和距离，包括4种力的作用：2Ag-Ab结合的离解力指Ag-Ab结合具有可逆性，因为Ag-Ab之间靠非共价结合，因此在一定条件下可使其解离。解离后的Ag-Ab仍保留其原有活性。1结合比例Ag与Ab的结合常需适当比例才出现可见反2应，在最适比例时反应最明显；这种现象可以用“格子学说”来解释：Ab(1gG)3为二价，Ag通常为多价，只有Ag，Ab结合形4成大的复合物，肉眼才可见；带现象只有当Ag与Ab比例适当时，才能形成大的复合物，比例不适当，就只能形成小的复合物而抑制反应现象的出现.前带现象：Ab过剩，Ag过少；稀释Ab后带现象：Ag过剩，Ab过少；稀释Ag。01030203温度；02电介质：生理盐水，缓冲盐水，少数动物(禽)血清用8.5％NaCl；01血清学反应的影响因素04pH：pH6.0～8.0检样量少，预处理简单：三、血清学技术的优越性01种类多，可择优选用方法简便快速特异性、敏感性Ag/Ab定位、定量一滴血清/血、一根羽毛、少许组织悬液、植物一片子叶等。02血清学试验的制定原则特定的或建立新的血清学方法时，应注意以下原则：Ag准备和提纯购自试剂公司：如半Ag、激素、酶、农药、抗生素、昂贵的天然Ag等。01自制：一般天然Ag、动物血清、组织Ag等02(二)Ab制备提纯(三)操作程序制定(四)材料准备和滴定：工作浓度滴量(五)试验条件选择：(六)特异性试验1．Ag、Ab验证：反复、重复验证2．交叉试验3．抑制试验(阻断)敏感性试验01重复性试验02稳定性试验03血清学诊断Ag/Ab亚细胞、细胞水平定位物种鉴定分型生物活性物质超微定量Ag组分分析，如病毒结构蛋白可用免疫转印，免疫沉淀(琼扩、电泳、交叉免疫电泳等)有机物提取纯化010305020406五、血清学试验的应用血清学试验的类型沉淀反应：环状沉淀试验琼脂扩散：免疫电泳对流电泳火箭电泳双向电泳