中成药中大米源性成分检测-PCR法.docxVIP

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ICS

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CCS

FDSA

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中国食品药品企业质量安全促进会团体标准

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FORMTEXT中成药中大米源性成分定性检测方法

PCR法

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PCRmethod

（征求意见稿）

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FORMDROPDOWN

FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX发布

FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX实施

FORMTEXT中国食品药品企业质量安全促进会??发布

STYLEREF标准文件_文件编号T/CIQAXXXX—XXXX

STYLEREF标准文件_文件编号T/FDSAXXXX—XXXX

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目次

TOC\o1-1\h\t标准文件_一级条标题,2,标准文件_附录一级条标题,2,前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4原理 1

5试剂与材料 1

6仪器设备 3

7试样选取与制备 3

8检测方法 3

10检测过程中防止交叉污染的措施 5

11废弃物处理 5

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由中国食品药品企业质量安全促进会并归口。

本文件起草单位：南京江北新区生物医药公共服务平台。

本文件主要起草人：。

本文件为首次发布。

中成药中大米源性成分定性检测方法

PCR法

范围

本文件规定了中成药中大米源性成分检测的PCR方法。

本文件适用于中成药中大米源性成分的检测。

本方法的检出限为0.1%。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T27403—2008实验室质量控制规范食品分子生物学检测

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

PCR法（PolymeraseChainReactionMethod）

聚合酶链式反应，指在PCR体系中加入扩增预混液，利用核酸电泳技术检测PCR扩增结果。

核酸电泳技术（NucleicAcidElectrophoresisTechnology）

利用核酸电泳技术鉴定PCR结果。

基因克隆及测序技术（GeneCloningandSequencingTechnology）

利用基因测序仪确定DNA序列。

原理

利用裂解液提取中成药中大米源性DNA，以提取的DNA为模板进行PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物；PCR阳性产物采用克隆测序进行确证。

试剂与材料

除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂，实验用水符合GB6682的要求。

DNA提取用试剂

5.1.1大米源性鉴别引物：5TTAGCCTCCCGCTGCAGA3和5AGAGTCCACAAGTGCTCCCG3；

5.1.2阳性对照：用市售大米样品做阳性对照；

5.1.3超纯水；

5.1.4琼脂糖：电泳纯；

5.1.5乙醇；

5.1.6溴化乙锭；

5.1.7异丙醇；

5.1.8氯仿；

5.1.9Tris-HCl；

5.1.10EDTA.2Na·2H2O；

5.1.11十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）；

5.1.12氯化钠（NaCl）；

5.1.13硼酸；

5.1.14氯化镁（MgCl2）；

5.1.15浓盐酸；

5.1.16氢氧化钠；

5.1.17溴酚蓝。

溶液配制：

5.2.170%乙醇：取70ml乙醇（5.1.5）与30ml超纯水混匀（5.1.3）；

5.2.2氯仿/异戊醇（24：1）抽提液：取24ml氯仿（5.1.8）和1ml异丙醇（5.1.7），混匀；

5.2.31mol/LTris-HCl（pH8.0）：称取Tris-HCl（5.1.9）121.1g溶解于约800ml超纯水（5.1.3）中，加浓盐酸（5.1.15）或