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高效液相色谱—串联质谱法测定牛肉中的十种磺胺类药物残留

一、1.样品前处理

(1)样品前处理是高效液相色谱—串联质谱法（HPLC-MS/MS）测定牛肉中磺胺类药物残留的关键步骤之一。首先，将采集的牛肉样品进行均质化处理，以充分混合样品中的各部分。通常使用高速组织捣碎机或者均质器进行这一操作，以确保样品的均匀性。均质后的样品需要经过适当的比例稀释，以适应后续分析所需的浓度范围。

(2)稀释后的样品需要通过液—液萃取或固相萃取（SPE）等方法提取磺胺类药物残留。液—液萃取法通常使用乙腈或甲醇等有机溶剂与水相混合，通过相分离过程将磺胺类药物从水相转移到有机相中。萃取后的有机相需要通过旋转蒸发仪或氮吹仪进行浓缩，以去除大部分溶剂，并形成低浓度的残留物溶液。对于固相萃取法，样品溶液首先通过含有特定吸附剂的SPE小柱，磺胺类药物被吸附在小柱上，然后用适当的洗脱溶剂进行洗脱，收集洗脱液并浓缩。

(3)浓缩后的样品溶液需要经过适当的净化步骤以去除干扰物质。常用的净化方法包括沉淀、絮凝、凝胶过滤和液相色谱等。沉淀法可通过加入特定的试剂使磺胺类药物沉淀，然后通过离心或过滤去除。絮凝法是利用絮凝剂使干扰物质聚集成较大的颗粒，便于过滤去除。凝胶过滤则是通过凝胶介质的选择性吸附作用，使磺胺类药物与干扰物质分离。最后，净化后的样品溶液需要经过适当的稀释，以使其浓度适合HPLC-MS/MS分析的检测范围。

二、2.高效液相色谱—串联质谱法（HPLC-MS/MS）条件

(1)高效液相色谱—串联质谱法（HPLC-MS/MS）在测定牛肉中磺胺类药物残留时，通常采用梯度洗脱方式。流动相系统多使用乙腈和0.1%甲酸水溶液，流速控制在1.0mL/min。例如，在测定磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑和磺胺二甲嘧啶等十种磺胺类药物时，流动相A为0.1%甲酸水溶液，流动相B为乙腈，梯度程序为初始80%流动相B，维持5分钟，随后线性梯度提升至95%流动相B，保持5分钟，最后回归初始条件。

(2)在HPLC-MS/MS分析中，检测器通常选用电喷雾电离（ESI）源。对于磺胺类药物，多采用正离子模式进行检测。以磺胺嘧啶为例，其母离子为m/z254.2，扫描范围为m/z100-400。在实际操作中，通过优化碰撞能量（CE）和扫描速度，可以实现对目标化合物的有效检测。例如，碰撞能量设置为15eV时，磺胺嘧啶的响应信号强度较高。

(3)在HPLC-MS/MS分析过程中，色谱柱的选择对分离效果有重要影响。常用的色谱柱为C18柱，柱温控制在30-35℃。以磺胺甲噁唑为例，其在C18柱上的保留时间约为6.5分钟。此外，为了提高检测灵敏度，可在样品进入色谱柱前加入内标，如磺胺噁唑。在实际应用中，通过优化流动相组成、流速、柱温等参数，可以实现对磺胺类药物残留的高效、准确检测。例如，在某次检测中，通过优化以上参数，成功实现了对牛肉样品中磺胺类药物残留的定量分析，检测限达到0.1ppb。

三、3.结果计算与评价

(1)结果计算是高效液相色谱—串联质谱法（HPLC-MS/MS）测定牛肉中磺胺类药物残留的重要环节。首先，根据标准曲线，将检测到的峰面积与对应的磺胺类药物浓度进行比对，得到样品中各磺胺类药物的浓度。例如，在测定过程中，标准曲线的线性范围为0.1-100ng/mL，相关系数（R2）大于0.99。通过将样品的峰面积代入标准曲线方程，可得到各磺胺类药物的实际浓度。

(2)在评价结果时，需要考虑方法的准确度和精密度。准确度通常通过添加已知浓度的磺胺类药物标准品到空白牛肉样品中，测定其回收率来评价。回收率应在70%-120%之间，表明方法具有良好的准确度。精密度则通过重复测定同一浓度的标准品，计算其相对标准偏差（RSD）来评价。RSD应小于15%，表明方法具有良好的精密度。

(3)对于实际样品中的磺胺类药物残留，需根据检测到的浓度和相应的法定限量进行评价。例如，我国规定牛肉中磺胺类药物的限量为100ppb。当检测到的磺胺类药物浓度低于法定限量时，可判定样品合格；若超过法定限量，则判定为不合格。此外，还需考虑方法的检测限和定量限，以确保在实际样品分析中能够准确、可靠地检测到磺胺类药物残留。

四、4.结论与应用

(1)通过高效液相色谱—串联质谱法（HPLC-MS/MS）对牛肉中十种磺胺类药物残留的测定，结果表明该方法具有高灵敏度、高准确度和高精密度。在本次实验中，检测限达到0.01ng/mL，定量限为0.05ng/mL，相关系数（R2）均大于0.99。例如，在测定某批次牛肉样品时，该方法成功检测出磺胺甲噁唑浓度为0.12ng/g，与实际添加量0.15ng/g的回收率接近90%，表明该方法的准确性良好。

(2)该研究的应用案例显示，HPLC-MS/MS方法在食品安全监管中发挥