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植物油中苯并a芘的测定液相色谱-荧光检测法

一、1.测定原理

(1)测定原理基于液相色谱-荧光检测法对植物油中苯并a芘的含量进行定量分析。该方法首先将植物油样品进行适当的预处理，包括溶剂提取、净化和浓缩等步骤，以去除干扰物质并富集目标化合物。预处理后的样品通过液相色谱柱进行分离，苯并a芘等目标化合物在色谱柱上根据其不同的亲和力和保留时间得到分离。分离后的化合物进入荧光检测器，由于苯并a芘具有特定的荧光特性，在特定波长下可以发出荧光信号，通过检测荧光信号的强度，即可定量分析出样品中苯并a芘的含量。

(2)液相色谱-荧光检测法测定苯并a芘的原理基于苯并a芘分子结构的特殊性。苯并a芘是一种多环芳烃，其分子结构中含有多个共轭双键，这些双键在特定波长的紫外光照射下能够产生荧光。荧光检测器通过检测这些荧光信号，根据荧光强度的变化来定量分析样品中苯并a芘的含量。由于苯并a芘的荧光特性具有很高的专一性，因此该方法对苯并a芘的检测具有很高的灵敏度和选择性。

(3)在液相色谱-荧光检测法中，样品的预处理步骤是关键。预处理包括溶剂提取、净化和浓缩等环节。溶剂提取是为了从植物油中提取出苯并a芘，常用的溶剂有正己烷、二氯甲烷等。净化步骤则是为了去除提取过程中可能引入的杂质，常用的净化方法有固相萃取、液-液萃取等。浓缩步骤则是为了提高检测灵敏度，通常通过旋转蒸发或氮吹等方法将样品浓缩。预处理效果的好坏直接影响后续分析结果的准确性和重现性。

二、2.仪器与试剂

(1)在进行植物油中苯并a芘的测定时，所需的仪器主要包括高效液相色谱仪（HPLC）配备荧光检测器（FLD）、自动进样器、柱温箱、真空泵、旋转蒸发仪、氮吹仪、固相萃取装置等。高效液相色谱仪的流动相系统通常采用二元梯度洗脱，流速控制在1.0-2.0mL/min之间。荧光检测器的激发波长为360nm，发射波长为420nm。自动进样器的样品室温度通常设置在室温，以保证样品在进样过程中的稳定性。柱温箱的温度设置在30-40℃之间，以确保色谱柱的稳定性和目标化合物的有效分离。真空泵和氮吹仪用于样品的浓缩和干燥，固相萃取装置用于样品的净化。

(2)试剂方面，常用的溶剂包括正己烷、二氯甲烷、甲醇等，纯度要求为色谱纯。正己烷在提取过程中作为溶剂，其沸点为69℃，密度约为0.66g/cm3。二氯甲烷用于样品的净化和浓缩，沸点为40℃，密度约为1.33g/cm3。甲醇在样品的预处理过程中作为溶剂，沸点为64.7℃，密度约为0.79g/cm3。此外，还需要使用无水硫酸钠、活性炭、氧化铝等固体试剂，以及硝酸、盐酸等无机酸。无水硫酸钠的粒度要求在0.5-1.0mm之间，用于样品的干燥。活性炭的粒度要求在0.2-0.5mm之间，用于样品的净化。氧化铝的粒度要求在0.2-0.5mm之间，用于样品的吸附。

(3)案例分析：某植物油厂在生产过程中检测其产品中的苯并a芘含量。该厂采用液相色谱-荧光检测法进行测定，所用仪器为Agilent1260高效液相色谱仪配备FLD检测器，流动相为甲醇-水（体积比80:20），流速为1.5mL/min，柱温为35℃。样品预处理过程中，采用固相萃取法净化，使用C18固相萃取小柱。检测结果显示，该植物油产品中苯并a芘含量为0.5ng/g，符合国家标准规定。在该案例中，所使用的试剂均为色谱纯，仪器性能稳定，确保了检测结果的准确性和可靠性。

三、3.测定方法

(1)测定植物油中苯并a芘含量的液相色谱-荧光检测法主要包括样品预处理、液相色谱分离和荧光检测三个步骤。首先，对植物油样品进行预处理，包括溶剂提取、净化和浓缩。通常采用正己烷作为提取溶剂，通过超声波辅助提取，将苯并a芘从植物油中提取出来。提取后的溶液经过适当的净化步骤，如固相萃取或液-液萃取，以去除干扰物质。净化后的样品通过旋转蒸发或氮吹仪进行浓缩，以减少样品体积，提高检测灵敏度。浓缩后的样品用流动相溶解，并转移至自动进样器。

(2)液相色谱分离过程中，样品溶液通过高效液相色谱柱进行分离。色谱柱通常选用C18或C8键合硅胶柱，柱长为250mm，内径为4.6mm，粒度为5μm。流动相系统采用梯度洗脱，以甲醇或乙腈作为有机相，水或磷酸盐缓冲溶液作为水相。梯度洗脱程序根据苯并a芘的保留时间和其他化合物的分离效果进行优化。在色谱分离过程中，控制柱温在30-40℃之间，以保持色谱柱的稳定性和目标化合物的有效分离。流动相和样品溶液在使用前需进行过滤，以防止颗粒物质堵塞色谱柱。

(3)荧光检测是液相色谱-荧光检测法的关键步骤。苯并a芘在激发波长为360nm的光照下，可以发出特征性的荧光信号，发射波长为420nm。荧光检测器通过检测苯并a芘的荧光强度，实现对样品中苯并a芘含量的定量分析。在荧光检测过程中，需要优化激发和发射波长、