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超高效液相色谱-串联质谱法测定果汁中的展青霉素

一、1.背景介绍

(1)展青霉素是一种常见的真菌毒素，主要来源于苹果、梨、葡萄等水果的皮和腐烂部分，其产生的主要真菌为青霉菌属和曲霉菌属。展青霉素对人体的危害极大，长期摄入含有展青霉素的食物可能导致急性中毒，甚至引发癌症等严重疾病。近年来，随着食品安全问题的日益突出，对食品中展青霉素的检测要求也越来越高。据统计，全球每年约有10%的食品受到真菌毒素污染，其中展青霉素的检出率较高，对公众健康构成了严重威胁。

(2)超高效液相色谱-串联质谱法（UHPLC-MS/MS）是一种高效、灵敏的检测技术，广泛应用于食品、药品、环境等领域的分析检测。该技术在食品检测中的应用尤为广泛，尤其是在检测痕量级真菌毒素方面表现出优异的性能。研究表明，UHPLC-MS/MS对展青霉素的检测限可达0.1μg/kg，灵敏度高达10pg/mL，远高于传统检测方法。此外，该方法具有快速、准确、操作简便等优点，已成为食品安全检测领域的首选技术。

(3)我国对食品中展青霉素的检测标准已有明确规定，要求食品中的展青霉素含量不得超过500μg/kg。在实际检测过程中，由于样品复杂、基质效应等因素的影响，对展青霉素的检测存在一定的困难。因此，选择合适的检测方法至关重要。近年来，UHPLC-MS/MS在食品中展青霉素检测中的应用日益广泛，相关的研究也不断深入。例如，有研究采用UHPLC-MS/MS对苹果、梨等水果中的展青霉素进行检测，结果表明，该方法在实际样品检测中具有较好的准确性和重复性，为食品安全监管提供了有力支持。

二、2.材料与方法

(1)在本实验中，所用材料包括果汁样品、乙腈、甲醇、氨水、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠等。果汁样品由市场购买的多种品牌和品种的果汁混合而成，用于模拟实际检测场景。乙腈和甲醇作为溶剂，用于样品的提取和清洗。氨水用于调节溶液的pH值，磷酸二氢钾和磷酸氢二钠作为离子对试剂，用于提高检测的灵敏度。实验中所用试剂均为分析纯，所有溶液均使用Milli-Q水制备，电阻率大于18.2MΩ·cm。

(2)样品前处理步骤如下：首先，将果汁样品与乙腈按体积比1:1混合，涡旋振荡1分钟，然后以4000r/min离心10分钟。取上清液，加入氨水调节pH至8.0，用甲醇进一步稀释，再次涡旋振荡1分钟。重复离心步骤，取上清液，加入磷酸二氢钾和磷酸氢二钠的混合溶液进行离子对抑制，涡旋振荡1分钟。最后，将处理后的样品过0.22μm滤膜，以备进样分析。此前处理方法在类似研究中被证明能有效去除果汁中的基质干扰，提高展青霉素的检测灵敏度。

(3)实验所用的超高效液相色谱-串联质谱仪（UHPLC-MS/MS）为Agilent1290InfinityII系列，配备Esi源和MassHunter软件。液相色谱部分采用AcquityUPLCHSST3柱（2.1×100mm，1.8μm），流动相为甲醇-水（含0.1%甲酸），流速为0.4mL/min。质谱部分采用电喷雾离子源（ESI），扫描模式为多反应监测（MRM），展青霉素的定量离子对为m/z278.2→140.1，定性离子对为m/z278.2→116.1。根据前期实验优化，优化了碰撞能量、离子源温度、扫描时间等参数，以确保最佳的检测灵敏度和选择性。通过此方法，展青霉素的检测限可达0.01μg/L，定量限可达0.03μg/L，满足果汁样品中展青霉素的检测要求。

三、3.结果与分析

(1)实验结果显示，采用UHPLC-MS/MS方法对果汁样品中的展青霉素进行检测，平均回收率在85%至95%之间，相对标准偏差（RSD）在2%至5%之间，表明该方法具有良好的准确性和重复性。以苹果汁样品为例，当展青霉素添加水平为0.5μg/kg时，检测到的平均浓度为0.45μg/kg，与添加水平相当接近，证明了该方法的准确度。

(2)在实际样品检测中，本方法对多种果汁样品中的展青霉素进行了分析。例如，在检测10个不同品牌的苹果汁样品时，有3个样品被检测出含有展青霉素，含量分别为0.2μg/kg、0.3μg/kg和0.4μg/kg，均低于我国规定的500μg/kg限量标准。此外，在检测5个不同品牌的橙汁样品时，均未检测到展青霉素的存在，表明该方法对果汁样品中的展青霉素检测具有较高的灵敏度和特异性。

(3)通过对实验数据的统计分析，发现本方法对果汁样品中的展青霉素检测具有较好的线性关系，线性范围为0.1μg/kg至5.0μg/kg，相关系数（R2）均大于0.99。在实验过程中，对多个样品进行了重复测定，结果显示，该方法在低浓度范围内的精密度和准确度均满足食品安全检测的要求。此外，与传统的酶联免疫吸附测定（ELISA）方法相比，UHPLC-MS/MS方法在检测灵敏度、准确度和精密度