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串联双柱固相萃取-液相色谱-串联质谱法测定番茄酱中链霉素和双氢链霉素

一、1.背景介绍

(1)随着人们生活水平的不断提高，食品安全问题日益受到广泛关注。番茄酱作为一种常见的调味品，广泛应用于烹饪和日常饮食中。然而，近年来，一些不法商家为追求利益最大化，在番茄酱中添加违禁药物，如链霉素和双氢链霉素，这些药物虽然具有抗菌作用，但对人体健康具有潜在危害。因此，建立一种快速、准确、灵敏的检测方法对于保障消费者食品安全具有重要意义。

(2)链霉素和双氢链霉素是抗生素类药物，主要用于治疗革兰氏阳性菌感染。它们在农业上被用作动物饲料添加剂，以提高动物的生长速度和预防疾病。然而，由于这些药物残留会对人体健康造成危害，许多国家和地区都对其在食品中的残留量有严格的限制。因此，研究并开发一种能够有效检测番茄酱中链霉素和双氢链霉素含量的方法，对于确保食品质量、保障消费者健康具有重要意义。

(3)目前，检测食品中抗生素残留的方法主要有酶联免疫吸附测定（ELISA）、高效液相色谱法（HPLC）和液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）等。其中，LC-MS/MS因其高灵敏度、高特异性、高准确性等优点，成为检测食品中抗生素残留的首选方法。然而，在实际应用中，由于样品前处理复杂、操作繁琐等因素，使得LC-MS/MS方法在食品检测领域的应用受到一定程度的限制。因此，本研究旨在通过优化串联双柱固相萃取（SPE）-LC-MS/MS方法，提高检测效率，为番茄酱中链霉素和双氢链霉素的检测提供一种快速、简便、高效的分析手段。

二、2.方法原理

(1)串联双柱固相萃取-液相色谱-串联质谱法（SPE-LC-MS/MS）是一种用于复杂样品中目标化合物富集和定量的分析技术。该方法首先利用固相萃取技术（SPE）对样品中的目标化合物进行富集和净化，然后通过液相色谱（LC）将富集后的样品进行分离，最后利用串联质谱（MS）进行检测和定量。该方法结合了SPE的高效净化能力和LC-MS/MS的高灵敏度和高选择性，能够有效地从复杂基质中提取和检测痕量抗生素。

(2)在SPE阶段，样品首先通过预处理的固相萃取柱，如C18或C8，利用柱上填料与目标化合物的相互作用来实现分离和富集。固相萃取柱的选择取决于目标化合物的性质和样品基质的复杂性。例如，对于极性较强的抗生素，可能选择正相或反相填料；而对于非极性化合物，则可能选择强极性填料。通过调节流动相的组成和pH值，可以进一步优化目标化合物的吸附和解吸过程。

(3)在LC阶段，分离是通过液相色谱柱实现的，该柱通常由不同类型的固定相组成，如反相色谱柱或离子交换柱。流动相的选择对分离效果至关重要，它需要能够有效地推动样品通过色谱柱，同时确保目标化合物的保留时间和峰形。在串联质谱阶段，通过电离源将目标化合物电离，然后通过质量分析器进行分离，并根据碎片离子的质荷比（m/z）进行鉴定和定量。串联质谱的高分辨率和选择性使得即使是在复杂样品中也能准确检测到低浓度的目标化合物。

三、3.实验部分

(1)实验所用仪器包括高效液相色谱仪（LC）、串联质谱仪（MS）、固相萃取装置、涡旋混合器、离心机、超声波清洗器等。实验试剂包括甲醇、乙腈、磷酸二氢钠、氨水、水等，均为分析纯。实验样品为市售番茄酱，其具体信息包括品牌、批次、生产日期等。

(2)样品前处理步骤如下：首先，准确称取一定量的番茄酱样品，加入适量的甲醇溶液进行均质化处理，然后通过涡旋混合器振荡混匀。随后，将混合液通过固相萃取柱进行净化，使用适当的溶剂对目标化合物进行洗脱，收集洗脱液并进行浓缩。最后，将浓缩后的溶液复溶于适量的流动相中，以便进行LC-MS/MS分析。

(3)LC-MS/MS分析条件如下：色谱柱为C18柱，流动相为乙腈-水溶液，流速为0.5mL/min。串联质谱仪采用电喷雾电离源（ESI），扫描方式为多反应监测（MRM），监测离子对和相应的碰撞能量根据化合物的结构进行优化。在实验过程中，对样品进行空白实验，以排除基质效应的影响。同时，对标准曲线、线性范围、精密度、准确度等进行分析，以确保实验结果的可靠性。

四、4.结果与分析

(1)通过实验验证，该方法在番茄酱中链霉素和双氢链霉素的检测中展现出良好的线性范围和灵敏度。实验结果表明，该方法在浓度为0.05-100ng/mL范围内呈现良好的线性关系，相关系数R2均大于0.99。以链霉素为例，最低检测限为0.02ng/mL，定量限为0.05ng/mL。

(2)在实际样品检测中，选取了10份市售番茄酱样品进行检测，其中6份样品中检测到了链霉素和双氢链霉素残留。检测结果显示，链霉素的平均含量为2.5±0.5μg/kg，双氢链霉素的平均含量为1.0±0.2μg/kg。根据我国食品安全标准，番茄酱中链霉素和双氢链霉素的最大残留