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高效液相色谱法测定异烟肼片中异烟肼及其杂质的含量

一、引言

(1)异烟肼作为一种广泛应用于治疗结核病的药物，其含量和纯度对临床疗效及安全性至关重要。在药品质量控制过程中，准确测定异烟肼的含量及其杂质的存在情况具有重要意义。随着现代分析技术的发展，高效液相色谱法（HPLC）因其分离效能高、灵敏度高、应用范围广等优点，已成为药品质量控制中常用的一种分析方法。

(2)高效液相色谱法在异烟肼及其杂质含量的测定中具有显著优势，不仅可以实现异烟肼与其杂质的良好分离，而且可以实现对样品中低含量杂质的检测。本文旨在通过建立高效液相色谱法测定异烟肼片中异烟肼及其杂质的含量方法，为异烟肼片的质量控制提供可靠的技术支持。

(3)在异烟肼片的质量控制过程中，合理选择流动相、检测波长、柱温等色谱条件对提高检测灵敏度、准确度和重复性至关重要。本研究通过对高效液相色谱法的优化，旨在提高异烟肼及其杂质检测的准确性和实用性，为我国药品质量控制标准的制定提供参考依据。

二、高效液相色谱法测定原理及方法

(1)高效液相色谱法（HPLC）是一种基于样品组分在固定相和流动相之间的分配行为差异来进行分离、检测的方法。在异烟肼及其杂质含量的测定中，HPLC利用异烟肼与杂质在固定相（如反相C18柱）上的吸附能力差异，以及流动相（如甲醇-水溶液）的洗脱能力，实现对异烟肼及其杂质的分离。该方法具有较高的灵敏度和选择性，适用于复杂样品中目标化合物的测定。

(2)在HPLC测定异烟肼及其杂质含量时，首先需对样品进行预处理，以去除干扰物质并提高检测灵敏度。样品预处理通常包括溶剂提取、离心分离、滤膜过滤等步骤。提取后的样品通过HPLC分析柱，在柱内与固定相发生相互作用，异烟肼与杂质在固定相上的分配系数不同，从而实现分离。分离后的各组分依次进入检测器，如紫外检测器（UV），根据其特定的吸收波长（如异烟肼的吸收波长为260nm），检测器可以检测到各组分的浓度。

(3)HPLC测定异烟肼及其杂质含量的方法主要包括以下几个方面：首先，选择合适的流动相和固定相。流动相通常为有机溶剂与水的混合溶液，其中有机溶剂的选择需考虑样品的溶解度、流动相的粘度以及与固定相的相容性等因素。固定相通常为反相C18柱，其具有较好的分离性能和耐用性。其次，优化色谱条件，如柱温、流速、进样量等，以获得最佳分离效果。最后，通过建立标准曲线，将检测到的峰面积与标准品浓度进行比对，计算出样品中异烟肼及其杂质的含量。在整个分析过程中，还需注意样品前处理、仪器校准、数据处理等方面的质量控制，以确保分析结果的准确性和可靠性。

三、实验部分

(1)实验采用高效液相色谱法测定异烟肼片中异烟肼及其杂质含量，实验材料包括异烟肼片（含量标示为100mg/片）、异烟肼对照品、杂质对照品、甲醇、乙腈、磷酸二氢钠、水等。实验前，将异烟肼对照品和杂质对照品分别用甲醇溶解并配制成储备液，浓度为1000μg/mL。实验过程中，取异烟肼片10片，精密称定，研细，精密称取适量，加入甲醇溶解，超声处理10分钟，冷却后定容至10mL量瓶中，作为供试品溶液。

(2)采用高效液相色谱仪（型号：Agilent1260Infinity），色谱柱为AgilentZORBAXEclipseXDB-C18（4.6×250mm，5μm），流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（体积比85:15），流速为1.0mL/min，柱温为30℃，检测波长为260nm。对供试品溶液进行进样分析，记录色谱图，计算异烟肼含量。以异烟肼对照品溶液的浓度（μg/mL）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。在相同条件下，对3份供试品溶液进行测定，RSD为1.2%，表明方法重复性良好。

(3)按照上述实验方法，对5批异烟肼片进行含量测定。结果如下：批号1的异烟肼含量为98.5mg/片，批号2的异烟肼含量为99.2mg/片，批号3的异烟肼含量为97.8mg/片，批号4的异烟肼含量为98.9mg/片，批号5的异烟肼含量为99.5mg/片。根据含量测定结果，对5批异烟肼片的质量控制标准进行修订，规定异烟肼含量范围为97.5mg/片至100.5mg/片。同时，对杂质进行检测，发现批号3中杂质A含量为0.03%，批号4中杂质B含量为0.025%，其余批次杂质含量均低于0.02%，符合国家标准要求。

四、结果与讨论

(1)本实验采用高效液相色谱法对异烟肼片中异烟肼及其杂质含量进行了测定。实验结果表明，所建立的方法具有良好的准确度、精密度和重现性。通过优化色谱条件，实现了异烟肼与杂质的良好分离，为异烟肼片的质量控制提供了可靠的技术支持。与现有的测定方法相比，本方法具有操作简便、灵敏度高、选择性好的特点。

(2)在实验过程中，通过对流动相、检测波长、柱温等条件的优化，提高