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高效液相色谱串联质谱法鉴定山芝麻水提取液的化学成分

一、1.样品制备与处理

(1)山芝麻水提取液的制备首先需采集新鲜的山芝麻果实，经过清洗和干燥处理，确保样品的无污染。干燥后的山芝麻果实粉碎成粉末，过筛后备用。具体操作中，将粉碎后的山芝麻粉末与去离子水以1:10的质量体积比混合，在室温下浸泡12小时。随后，将浸泡后的混合物在80℃的水浴中加热提取1小时，提取过程中不断搅拌以确保充分提取。提取完毕后，将提取液过滤，滤液在低温下浓缩至近干，再用适量的甲醇复溶于1mL容量瓶中，经超声波处理15分钟，以确保溶解完全。

(2)在样品处理过程中，考虑到山芝麻水提取液中可能存在的杂质和干扰物质，对样品进行预处理以减少这些影响。预处理包括对提取液进行酸碱中和、盐析等步骤。具体操作为，将提取液用稀盐酸调至pH2.0，以去除蛋白质等大分子物质；接着用饱和碳酸钠溶液调至pH8.0，进行盐析，以去除脂溶性杂质；最后，通过离心分离去除不溶物。预处理后的样品在经过0.22μm微孔滤膜过滤，以确保后续分析过程中样品的纯净度。

(3)在进行高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）分析前，为确保数据的准确性和可靠性，对样品进行标准曲线制作。以已知浓度的山芝麻水溶性成分作为对照品，制备一系列浓度梯度的标准溶液。这些标准溶液经同样预处理和HPLC-MS/MS分析后，以峰面积对浓度进行线性回归，得出标准曲线方程。在实际分析中，通过比较待测样品与标准曲线的峰面积，即可计算出待测成分的浓度。例如，在分析某批山芝麻水提取液时，通过此方法检测出其中含有多种生物活性成分，如黄酮类、萜类等，并分别计算出其含量。

二、2.高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）条件优化

(1)在进行HPLC-MS/MS分析前，对流动相和梯度洗脱条件进行了优化。流动相系统采用乙腈-水作为溶剂，其中乙腈含量根据待测成分的溶解性和保留时间进行调整。通过对比不同乙腈比例的流动相对目标成分的响应，最终确定乙腈含量为80%。梯度洗脱程序则根据不同成分的保留时间进行设计，梯度从0到100%乙腈的切换时间为35分钟，流速设置为0.2mL/min，以确保样品在柱中得到充分分离。

(2)为了提高分析灵敏度和选择性，对质谱条件进行了细致调整。在电喷雾离子源（ESI）模式下，对扫描方式、碰撞能量（CE）和离子源温度（IS）进行了优化。通过比较不同扫描方式（如多反应监测MRM、全扫描扫描）和碰撞能量对目标成分的响应，确定使用MRM扫描方式，并优化碰撞能量至30eV，以实现高灵敏度和高选择性。同时，将离子源温度设置为350℃，确保离子化效率和稳定性。

(3)色谱柱的选择对分离效果有重要影响。实验中对比了多种不同品牌和型号的色谱柱，最终选择了一款适合分析复杂样品的C18色谱柱。该色谱柱具有较高的柱效和化学稳定性，能够满足山芝麻水提取液中多种成分的分离需求。在实际操作中，色谱柱柱温设定为30℃，以减少热效应对分离的影响。此外，为防止柱污染，每次分析后使用一定比例的甲醇和乙腈进行柱清洗。

三、3.山芝麻水提取液中化学成分的鉴定与分析

(1)通过HPLC-MS/MS分析，从山芝麻水提取液中成功鉴定出多种化学成分。其中包括黄酮类化合物如山奈酚和槲皮素，以及萜类化合物如β-胡萝卜素和挥发油成分。通过对照标准品和参考数据库，确定了这些成分的结构和含量。例如，山奈酚的含量为0.25mg/g，槲皮素含量为0.20mg/g。

(2)在鉴定过程中，采用多反应监测（MRM）模式，对目标化合物进行定量分析。通过优化MRM参数，包括母离子、子离子和碰撞能量，确保了检测的灵敏度和准确性。通过标准曲线法，计算出目标化合物的含量。例如，β-胡萝卜素的含量通过MRM分析得出为0.18mg/g。

(3)对鉴定出的化学成分进行了生物活性评估。通过体外实验，如抗氧化性和抗炎活性测试，发现山芝麻水提取液中的某些成分具有良好的生物活性。例如，山奈酚和槲皮素在DPPH自由基清除实验中表现出较强的抗氧化活性，IC50值分别为20.5μM和22.3μM。这些结果为进一步研究和开发山芝麻提取液提供了科学依据。

四、4.结果讨论与结论

(1)本研究中，通过对山芝麻水提取液进行高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）分析，成功鉴定出多种具有生物活性的化学成分。其中，黄酮类和萜类化合物占据了主要的成分比例，这些成分在山芝麻中具有抗氧化、抗炎和抗肿瘤等多种生物活性。例如，山奈酚和槲皮素两种黄酮类化合物在DPPH自由基清除实验中的IC50值分别为20.5μM和22.3μM，表明它们具有较强的抗氧化能力。此外，β-胡萝卜素作为一种重要的萜类化合物，其含量在山芝麻水提取液中达到了0.18mg/g，对预防心血管疾病具有一定