江大考研微生物必看课件6-菌种选育.pptVIP

第六章

微生物菌种的选育;第一节从自然界中别离筛选菌种;1、生产菌株来源

索取或购置

自己选育

用原有菌株进行遗传改造进行育种

向菌种保藏机构索取、购置出发菌株进行选

从自然界中别离菌种

从自然界中别离菌种就是从自然界微生物资源中有目的、快速、准确地选出所需要的菌种。;设计方案→采样→增殖培养*→平板别离→筛选(初筛、复筛)→单株纯种别离→性能考察(生产性能试验、毒性试验、菌种鉴定〕;一、采样

从自然界中采集含目的菌的样品

1. 环境条件对土样本中微生物分布的影响

营养环境

水分

温度

通风

酸碱度

;2 .采样方法

〔1〕 去除表层土

〔2〕 取5-15cm土样几十克，装入无菌牛皮低袋或逆料袋中

3. 注意

记录：时间，地点，环境情况等

样品袋应封好口，防止水分失去

土样应在别离前破碎

尽快别离;二.增殖培养〔富集培养〕;1、增殖培养的方法

控制营养成分

控制培养基pH

控制培养温度

热处理——增殖芽孢细菌

添加抑制剂

;三.纯种别离;稀释别离涂布平板;稀释别离倾注平板;2、平皿反响快速检出法——定性或半定量

纸片培养显色法

透明圈法

变色圈法

生长圈法

抑制圈

;琼脂块培养法筛选抗生素产生菌程序;3、厌氧性微生物的别离法

〔1〕去除培养基中的溶解氧，降低Eh

〔2〕创造无氧环境

物理除氧空气置换法：枯燥器或厌氧培养罐

化学除氧H2+O2→H2O(钯作催化剂〕

GASPAK罐除氧：硼氢化钠、柠檬酸，碳酸氢钠化学反响产生H2和CO2，H2与O2反响生成水

〔3〕厌氧别离〔培养〕技术

高层琼脂柱技术

厌氧罐技术

厌氧手套箱技术;;;;好氧培养;五、培养工艺条件试验与生产试验

1、摇瓶发酵条件

培养基组成、初始pH、通风量〔装液量〕、接种量、培养温度…

2、小型台式发酵罐发酵工艺条件

溶解氧控制，pH值控制，原料添加模式，消泡剂…;第二节基因突变;突变〔Mutation〕定义：遗传物质核酸〔DNA或病毒中的RNA〕的分子结构或数量突然发生了可遗传的变化。

突变是一种遗传的状态，是基因由于结构发生改变从而由原来的存在状态变???另一种存在状态，即它的等位基因。

突变体：带有突变基因的细胞或个体

突变型：突变体的基因型或表型称为突变型，和其相对的原存在状态称为野生型。;一、突变类型;非整倍体aneuploidy：含有不完整状态的染色体组，一般是指二倍体中成对染色体成员的增加或减少。

单体〔二倍减一，monosomicdiploid):2n-1

缺体〔二倍减二，nullisomicdilpoid):2n-2

三体〔二倍加一，trisomicdiploid):2n+1

四体〔二倍加二，tetrasomicdiploid):2n+2

双二倍加一〔doubletrisomic〕:2n+1+1

局部二倍体〔merodiploid〕：细菌等原核生物中由一整条染色体和外来的一个染色体片段所构成的不完整二倍体。;2、染色体结构的变化;bf;(二)基因突变〔genemutation〕

----染色体局部座位内的变化

;;(3)遗传学效应

错义突变missensemutation：

同义突变silentmutation：

无义突变nonsensemutation：

;2、移码突变frameshiftmutation：由于一对或少数几对〔不是三的倍数〕核苷酸的插入或缺失而造成此后一系列遗传密码子的阅读框发生移位错误的突变。;PheAspGluProLeuCysThr

5’-TTCGATGAGCCCTTGTGCACG-3’

↓G→Amutation

PheAspLysProLeuCysThr

5’-TTCGATAAGCCCTTGTGCACG-3’

↓C→Tmutation

PheAspLysProLeuCysThr

5’-TTCGATAAGCCTTTGTGCACG-3’

↓C→Amutation

PheAspLysPro