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专题二十一基因工程和生物技术的安全性与伦理问题
题组二
一、选择题
1.[2023新课标理综,6分]某同学拟用限制酶(酶1、酶2、酶3和酶4)、DNA连接酶为工具,将目的基因(两端含相应限制酶的识别序列和切割位点)和质粒进行切割、连接,以构建重组表达载体。限制酶的切割位点如图所示。
下列重组表达载体构建方案合理且效率最高的是(C)
A.质粒和目的基因都用酶3切割,用E.coliDNA
B.质粒用酶3切割、目的基因用酶1切割,用T4DNA
C.质粒和目的基因都用酶1和酶2切割,用T4DNA
D.质粒和目的基因都用酶2和酶4切割,用E.coliDNA
[解析]只用一种限制酶切割质粒和目的基因,会使质粒和目的基因发生自身环化或者使目的基因在质粒中反向连接,而且酶3切割产生平末端,E.coliDNA连接酶不能连接具有平末端的DNA片段,A错误;用酶1切割目的基因,产生的是黏性末端,用酶3切割质粒,产生的是平末端,无法连接,B错误;质粒和目的基因都用酶1和酶2切割后,可使用T4DNA连接酶连接,使目的基因定向插到质粒中,C正确;酶2和酶4切割后产生的黏性末端相同,易导致目的基因和质粒自身环化或者使目的基因在质粒中反向连接,并且用酶
【高分必备】在基因工程操作中,DNA连接酶主要有两类:一类是从大肠杆菌中分离得到的,称为E.coliDNA连接酶;另一类是从T4噬菌体中分离出来的,称为T4DNA连接酶。这两类酶都能将双链DNA片段“缝合”起来,恢复被限制酶切开的磷酸二酯键,但这两种酶的作用有所差别。E.coliDNA连接酶只能将具有互补黏性末端的DNA片段连接起来,不能连接具有平末端的DNA片段。而T4DNA连接酶既可以“缝合”
2.[2022辽宁,2分]抗虫和耐除草剂玉米双抗12-5是我国自主研发的转基因品种。为给监管转基因生物安全提供依据,采用PCR方法进行目的基因监测,反应程序如图所示。下列叙述正确的是(
A.预变性过程可促进模板DNA边解旋边复制
B.后延伸过程可使目的基因的扩增更加充分
C.延伸过程无需引物参与即可完成半保留复制
D.转基因品种经检测含有目的基因后即可上市
[解析]预变性的温度为94℃,在这个温度下,双链DNA解旋为单链,但模板链不易和引物结合,不能进行复制,A错误。延伸的目的是合成新的子链,后延伸延长了延伸时间,使目的基因的扩增更加充分,B正确。延伸过程需要引物与模板链结合,在引物的3端加上相应的核苷酸,C错误。转基因品种经检测含有目的基因且已经表达使生物体表现出相应性状后,还需要经过系列的安全性评价,符合相应标准后才能上市,D
二、非选择题
3.[2023全国乙理综节选,10分]GFP是水母体内存在的能发绿色荧光的一种蛋白。科研人员以GFP基因为材料,利用基因工程技术获得了能发其他颜色荧光的蛋白,丰富了荧光蛋白的颜色种类。回答下列问题。
(1)构建突变基因文库。科研人员将GFP基因的不同突变基因分别插入载体,并转入大肠杆菌制备出GFP基因的突变基因文库。
(2)构建目的基因表达载体。科研人员从构建的GFP突变基因文库中提取目的基因(均为突变基因)构建表达载体,其模式图如图所示(箭头为GFP突变基因的转录方向)。图中①为终止子(1分);②为启动子(1分),其作用是被RNA聚合酶识别并结合,驱动GFP突变基因的转录(2分)。
[解析]一个基因表达载体的组成,除了目的基因,还必须有启动子、终止子以及标记基因等。启动子是一段有特殊序列结构的DNA片段,位于基因的上游,它是RNA聚合酶识别和结合的部位,有了它才能驱动基因转录出mRNA,最终表达出人类需要的蛋白质。终止子相当于一盏红色信号灯,使转录在所需要的地方停下来,位于基因的下游,也是一段有特殊序列结构的DNA片段。
(3)目的基因的表达。科研人员将构建好的表达载体导入大肠杆菌中进行表达,发现大肠杆菌有的发绿色荧光,有的发黄色荧光,有的不发荧光。请从密码子特点的角度分析,发绿色荧光的可能原因是密码子具有简并性,GFP基因突变后编码的蛋白质与突变前相同(2分)(答出1点即可)。
[解析]结合题中信息可知,将构建好的表达载体导入大肠杆菌中进行表达,发现有的大肠杆菌发绿色荧光,即GFP蛋白的荧光颜色,推测发绿色荧光的可能原因是密码子具有简并性,GFP基因突变后编码的蛋白质与突变前的相同。
(4)新蛋白与突变基因的关联性分析。将上述发黄色荧光的大肠杆菌分离纯化后,对其所含的GFP突变基因进行测序,发现其碱基序列与GFP基因的不同,将该GFP突变基因命名为YFP基因(黄色荧光蛋白基因)。若要通过基因工程的方法探究YFP基因能否在真核细胞中表达,实验思路是
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