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ATPDNA连接酶（DNAligase）连接DNA链3?-OH末端和相邻DNA链5?-P末端，形成磷酸二酯键，从而把两段相邻的DNA链连接成完整的链。反应需要ATP。切刻的3’－OH和5’－P相邻切刻各自碱基处于配对状态需要能量：原核（ATP、NAD）真核（ATP）12所需条件：在复制中的用途：DNA链合成后引物被切除，并被DNA替代。此时DNA链上仍存在缺口，DNA连接酶会催化形成磷酸二酯键，将断裂的缺口连上，形成完整的DNA链。连接酶连接切口Mg2+连接酶ATP或NAD＋PPi或NMNATCGPTTPPPAACCTGAPACPPPPOHTGGATCGPTTPPPAACCTGAPACPPPTGGP缺口33555533模板链模板链DNA连接酶在复制、DNA修复、重组、剪接中均起缝合缺口作用。是重要的工具酶之一。01DNA复制的起始：就是要解开双链和生成引物。02DNA解成单链03由拓扑异构酶松弛超螺旋，解螺旋酶04解开双链，SSB结合到单链上使其稳定。三、DNA复制过程引发体（引物酶的作用下）在原点处合成一小段RNA引物（10-60个碱基不等）。引物的合成方向也是5′→3′方向，然后由DNA聚合酶合成DNA链。前导链合成一个引物，滞后链断续合成多个引物。01引物合成01行聚合作用。即新进入的dNTP与引物3′－OH形成磷酸二酯键，由5′?3′方向延长子链。在DNA聚合酶催化下，以解开的单链为模板，以四种dNTP为原料，进复制的延长在DNA复制中，DNA新链的合成是沿5′→3′的方向进行的。由于DNA分子的两条链是反向平行的，所以分别以两条链为模板的DNA链的复制方式是不同的。一条连续合成，另一条不连续合成。01半不连续复制：02DNA的一条链复制以3′→5′DNA母链为模板，DNA链的复制是沿5′→3′的方向连续进行的，称为前导链。01另一条以5′→3′DNA母链为模板，DNA链的复制不能连续进行，称为后随链，后随链的合成方向与前导链相反。02前导链(leadingstrand)顺着解链方向生成的子链，其复制是连续进行的，得到一条连续的子链。后随链(laggingstrand) 复制方向与解链方向相反，须等解开足够长度的模板链才能继续复制，得到的子链由不连续的片段所组成。[?:kɑ:zɑ:ki:,?.?uk?zɑ:ki:]当双链DNA解链后，前导链与后随链分别被同一个DNA聚合酶Ⅲ的不对称二聚体所合成，为保证二者聚合的方向相同，后随链必须绕成一个突环。一分子的DNApolIII.协同合成前导链和后随链DNA复制的半不连续模型图在细菌环状DNA复制的最后，会遇到起终止作用的特殊的核苷酸序列，这时DNA的复制就终止。01如果复制是双向复制，哪个方向的复制叉先遇到终止序列，哪个复制叉就停止复制。023.复制的终止不连续片段的连接DNA聚合酶ⅠDNA聚合酶Ⅰ原核细胞DNA的半不连续复制过程复制叉的移动方向拓扑异构酶DNA聚合酶III解螺旋酶RNA引物DNA聚合酶ISSB3′3′5′前导链后随链3′5′复制的起始DNA链的合成与延长DNA链合成的终止5′RNA引物3′3′DNA连接酶复制忠实性的保证1、复制中的即时校读功能:DNApol的3’?5’外切酶活性；2、引物RNA的作用:DNApol只能从引物的3’端延伸DNA；碱基配对协同性导致最初几个碱基错配率高，且不易校正；RNA引物最终被降解而避免错误；3、后随链的不连续合成：因其有利于错配碱基的校正；4、遵守严格的碱基配对规律；在大肠杆菌DNA的复制中，每聚合109到1010个碱基才出现一个错误，至少依赖四种机制：DNA聚合酶催化的反应5′至3′的聚合活性催化四种脱氧核苷三磷酸（dNTP）一个一个地接到DNA链末端3′-羟基上，形成3′，5′-磷酸二酯键，同时脱氧核苷三磷酸脱下焦磷酸。焦磷酸水解放出能量，促进DNA复制反应的进行。(dNMP)n+dNTP→(dNMP)n+1+PPi聚合反应机理：聚合反应的特点：(1)以单链DNA为模板(2)以dNTP为原料(3)引物提供3′-OH(4)聚合方向为5′→3′核酸外切酶活性3′→5′外切酶活性：切除错配的核苷酸5′→3′外切酶活性：切除引物切除突变的片段DNA聚合酶的种类 1.