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用液相色谱法测定农产品中黄曲霉毒素的净化方法

一、1.净化材料与方法

(1)在进行液相色谱法测定农产品中黄曲霉毒素的净化过程中，所选用的净化材料至关重要。常用的净化材料包括C18反相柱、OasisHLB小柱、固相萃取小柱等。C18反相柱适用于大多数有机溶剂的分离，其表面覆盖有C18键合相，对极性化合物具有较好的保留能力。OasisHLB小柱则具有疏水性和亲水性两种官能团，能够有效去除样品中的水分和极性杂质。固相萃取小柱则结合了多种净化功能，如吸附、解吸和过滤等，适用于复杂样品的净化。以C18反相柱为例，其填料粒径一般为5μm，填充密度约为1.0g/mL，能够提供较高的柱效和流速。

(2)在选择净化方法时，需要考虑样品的性质、检测方法的灵敏度以及净化材料的适用性。对于含有大量脂质和蛋白质的农产品样品，通常采用OasisHLB小柱进行净化，以去除脂质和蛋白质等大分子杂质。例如，在检测花生油中的黄曲霉毒素时，首先使用OasisHLB小柱对样品进行净化，去除脂质和蛋白质等杂质，然后使用液相色谱法进行检测。该方法在净化过程中，黄曲霉毒素的回收率可达90%以上，检测限可达0.1ng/g。

(3)在实际操作中，净化方法的选择还需结合具体的样品前处理工艺。以检测谷物中的黄曲霉毒素为例，首先将谷物样品进行粉碎和过筛，然后加入适当的溶剂进行提取。提取液经过初步过滤后，再使用固相萃取小柱进行净化。在此过程中，固相萃取小柱的吸附容量、流速和洗脱条件等参数都会影响最终的净化效果。以固相萃取小柱为例，其吸附容量一般在1mg左右，流速控制在1mL/min，洗脱溶剂通常为甲醇或乙腈。在实际操作中，通过优化这些参数，可以使黄曲霉毒素的回收率达到95%以上，检测限达到0.05ng/g。

二、2.净化步骤与操作

(1)净化步骤首先涉及样品的提取。以农产品中黄曲霉毒素的检测为例，提取过程通常包括加入提取溶剂（如甲醇或乙腈）到样品中，通过超声波处理或振荡混合以加速毒素的溶解。提取液经过初步过滤，去除悬浮颗粒，然后转移至固相萃取小柱。在此步骤中，使用OasisHLB小柱可以去除样品中的脂质和蛋白质，而C18小柱则适用于极性化合物的分离。

(2)接下来是样品在固相萃取小柱上的净化过程。首先，使用适量的水或去离子水预洗小柱，以去除可能存在的无机盐和杂质。然后，将提取液过柱，毒素被小柱的吸附材料捕获，而其他杂质则随流出液排出。之后，使用适当比例的甲醇或乙腈进行梯度洗脱，以洗脱被捕获的黄曲霉毒素。例如，在检测玉米中的黄曲霉毒素B1时，使用70%甲醇溶液进行梯度洗脱，黄曲霉毒素B1的回收率可达90%以上。

(3)最后，将洗脱液浓缩干燥，通常使用旋转蒸发仪或氮吹仪，以去除溶剂。干燥后的残渣可能需要用少量流动相复溶于适当溶剂中，以便进行液相色谱分析。在此过程中，为确保检测的准确性，需要对洗脱液进行适当的稀释，通常使用流动相或去离子水。例如，在检测小麦中的黄曲霉毒素时，将浓缩后的洗脱液用流动相稀释至一定比例，以便于液相色谱检测，检测限可达到0.05ng/g。

三、3.净化效果评价

(1)净化效果评价是确保黄曲霉毒素检测准确性的关键步骤。评价方法包括对回收率、检测限和精密度等指标进行测定。回收率是指样品中目标化合物在经过净化步骤后的回收比例，理想的回收率应在80%至120%之间。例如，在检测花生样品中的黄曲霉毒素B1时，通过优化净化步骤，得到的回收率平均为95%，符合食品安全标准。

(2)检测限是指能够被液相色谱法检测到的最低浓度。检测限越低，意味着该方法对低浓度污染物的检测能力越强。在黄曲霉毒素的检测中，通常设定检测限为0.1ng/g或更低。例如，采用固相萃取和液相色谱联用技术，对农产品样品中的黄曲霉毒素B1进行检测，其检测限可达0.05ng/g，满足了国际食品安全标准的要求。

(3)精密度评价通过重复测试同一样品来确定，包括日内精密度和日间精密度。日内精密度是指同一天内对同一样品进行多次测定的结果一致性，而日间精密度则是指不同天对同一样品进行测定的结果一致性。在黄曲霉毒素检测中，通常要求日内精密度在15%以内，日间精密度在20%以内。例如，对某个农产品样品进行5次日内测定和5次日间测定，其日内精密度为10%，日间精密度为18%，表明该方法具有良好的精密度。