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色谱条件的选择－讲稿山东大学王吉顺2005.8色谱条件包括以下内容：1.仪器：生产商，型号2.色谱柱：柱商品名称，填料商品名称，填料类型，色谱柱长度（cm）和内径（mm），填料粒经（um）3.流动相：流动相组成和比例，流速（ml/min）4.检测器：型号及参数（如波长nm）5.进样量：体积（ul）6.柱温：（℃）其中我们更为关心的是：色谱柱和流动相（本章节主要讨论的问题）01大多数化合物是可以使用C18柱分离0218优点：柱便宜，流动相便宜，使用时间长，易于通过改变流动相得到最佳分离，03品本身具有纯度高的特点，容易分离，辅料和分解产物是分离的难点。04中药成分的分离，体液中药物成分的分离，微量成分的分离，杂质成分的分离，食品中药物残留的分离简单的多。色谱柱的选择查文献，学习别人的方法文献中没有的新药和新化合物可以使用结构类似化合物的色谱条件自己积累药物分析的色谱条件，从中寻找规律，尤其是要总结解决问题的方法。把自己积累的方法用于以后的色谱分析中。不建议在自己对被分离物质的性质不了解的情况下，自己摸索色谱条件010302选择色谱条件的方法硅胶型：SiO2；C18；C1三甲基；C2；C4；C8；CN；NH2；苯基聚合物型：聚苯乙烯类（离子交换；凝胶色谱柱）；聚丙烯酸酯（离子交换）；聚乙烯醇：C18；离子交换钛柱：比硅胶型的稳定性提高其它类型据担体材料分类色谱柱的分类正相：SiO2；CN；NH2；苯基反相：C18；C1三甲基；C2；C4；C8；CN；NH2；苯基离子交换：弱碱阴离子交换；弱酸阳离子交换强碱阴离子交换；强酸阳离子交换凝胶过滤：水溶性凝胶过滤；油溶性凝胶过滤其它类型：手性柱等根据分离方式分类色谱柱的分类10cm～50cm内径为制备柱014cm～8cm内径为标准柱023cm一下内径为小孔柱或微孔柱和毛细管柱03柱长一般为15cm、25cm、30cm；50cm一般用于制备柱或特殊柱型，5cm一下为快速柱(包括预柱和保护柱)04根据色谱柱尺寸分类色谱柱的分类结构特殊，一般使用离子交换柱分离，阳离子交换柱是使用最广泛,是最成熟的方法。分离氨基酸的阳离子柱分为锂型柱和钠型柱，锂型柱可以分离谷氨酰胺和谷氨酸。反相柱也可以分离氨基酸，但不能分离所有氨基酸。柱前衍生化法分离水解氨基酸也非常有效，且方法简便，所用的仪器简单。氨基酸色谱柱选择方法分析条件：氨基酸分析分析条件：色谱柱：Shim-pakISC-07/S1504Li（15cm×4.0mm）（Li型磺酸基，氨基酸分析专用柱）流动相：柠檬酸缓冲溶液，梯度洗脱流速：0.3ml/min柱温：55℃检测器：荧光（Ex.238nm,Em450nm）方法：OPA柱后衍生化法凝胶过滤：根据分子量的大小差别进行分离离子交换：根据分子所带的电荷的差别进行分离反相和疏水色谱：根据分子的疏水性质的差别进行分离亲和色谱：根据复合的相互作用的差别进行分离肽和蛋白质色谱柱选择方法分析条件：蛋白质分析条件：色谱柱：Shim-pakDiol－300（50cm×7.9mm）（二醇基水溶性凝胶柱，蛋白质分析专用柱）流动相：10mM磷酸缓冲液（pH＝7）和0.1MNaCl流速：1.0ml/min柱温：室温检测器：紫外（280nm）色谱峰：1.谷氨酸脱氢酶2.乳酸脱氢酶3.烯醇酶4.腺苷酸激酶5.细胞色素C分析条件：蛋白质分析条件：色谱柱：Shim-pakDiol－300（50cm×7.9mm）（消除残留硅醇基C2柱，300A多孔硅胶）流动相：硫酸铵/磷酸缓冲液（pH＝7）梯度洗脱流速：0.5ml/min柱温：室温检测器：紫外（220nm）色谱峰：1.细胞色素C2.肌红蛋白3.核糖核酸酶A4.铁传递蛋白5.糜蛋白酶原A1核酸2核酸在生命科学领域中占有重要位置，在今后的新药研发领域中同样占有重要