细菌的检查方法.ppt

是丹麦细菌学家革兰在1884年创造的，是细菌学上最经典、最常用的染色方法。标本采集和送检六原则避免杂菌污染不同期不同标本用抗生素以前标本必须新鲜采集病变明显部位标本作好标记细菌学诊断显微镜放大法：普通光学显微镜：0.25um0.25mm电子显微镜：透射电镜、扫描电镜染色法病原菌检测细菌形态与结构检查GramStain的意义指导选择抗菌药物将细菌区分为2大类结晶紫1min卢戈碘1min用于细菌致病性等方面的研究95%乙醇30s稀释复红30s1234脑脊液脓液G+葡萄串状球菌葡萄球菌形态和染色性具有特征的致病菌，直接涂片染色后镜检有助初步诊断。淤血点肾形,G-双球菌脑膜炎奈瑟菌痰液抗酸性细长杆菌结核杆菌直接涂片镜检病原菌检测分离培养和鉴定确诊细菌感染性疾病最可靠的方法（金标准),有助于选用抗菌药物及评价疗效。普通培养法（需氧培养法）高渗培养法厌氧培养法病原菌检测病原学诊断临床标本预处理增菌接种培养基，分离单个菌落各种鉴定试验涂片染色快速诊断试验生化试验血清学实验涂片染色药敏试验动物试验初步诊断报告最终诊断报告一般检验程序培养特征：营养、生长条件、分离培养和鉴定形态特征：细菌形态、排列、菌落特征生化反应：检测细菌对各种基质（糖类和蛋白质）的代谢作用和代谢产物的差异，借以区别和鉴定细菌。染色性123病原菌检测如:幽门螺杆菌尿素酶分解尿素产氨,使培养液变碱,pH指示剂变色。微量、快速、半自动或自动细菌生化鉴定和细菌药敏分析系统，使病原菌检出水平提高，时间缩短。生化反应病原菌检测血清学试验用含已知特异性抗体的免疫血清，可有效检出标本中极微量细菌特异抗原，或与分离培养出的未知纯种细菌进行血清学试验，确定致病菌的种或型。常用方法有玻片凝集试验、酶联免疫吸附试验（ELISA）、协同凝集、乳胶凝集、免疫电泳、间接血凝等试验。病原菌检测动物试验利用实验动物可进行病原菌的分离鉴定，检测细菌毒力等。肉、静脉等。接种途径有皮内、皮下、腹腔、肌常用实验动物有小鼠,豚鼠和家兔等。010203040506病原菌检测病原菌检测药物敏感试验01纸片法02试管稀释法03其他方法分子生物学技术核酸杂交技术PCR生物芯片技术病原菌检测聚合酶链反应是一种模拟天然DNA复制的体外扩增法，其基本原理如下：加热使双链DNA解开螺旋↓在退火温度条件下引物同模板杂交↓在TaqDNA聚合酶，dNTPs，Mg2+和合适pH缓冲液存在条件下延伸引物↓重复上述变性→退火→引物延伸过程至25-40个循环。靶序列被扩增上百万倍，达到体外扩增核酸序列的目的。PCR技术是丹麦细菌学家革兰在1884年创造的，是细菌学上最经典、最常用的染色方法。*