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柱后衍生高效液相色谱法测定罗汉果甜甙中黄曲霉毒素B1

一、引言

(1)罗汉果作为一种传统中药材，在我国民间应用已有悠久历史。其主要成分为罗汉果甜甙，具有降糖、降脂、抗病毒等药理活性。然而，在罗汉果的种植、采集和加工过程中，容易受到黄曲霉毒素B1（AflatoxinB1，AFB1）的污染。AFB1是一种强致癌物质，对人体健康危害极大。据世界卫生组织（WHO）统计，每年约有数十万人因AFB1中毒而死亡。因此，对罗汉果甜甙中AFB1的检测显得尤为重要。

(2)高效液相色谱法（HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC）因其分离效能高、灵敏度高、选择性好等优点，已成为食品安全检测中的常用手段。其中，柱后衍生高效液相色谱法（Post-columnDerivativeHPLC）在检测复杂基质中的痕量污染物方面具有显著优势。该方法通过在检测器前对目标化合物进行衍生化反应，提高其检测灵敏度和选择性，从而实现对低浓度污染物的有效检测。近年来，柱后衍生HPLC在食品、药品、环境等领域中得到了广泛应用。

(3)针对罗汉果甜甙中AFB1的检测，已有研究采用柱后衍生HPLC结合荧光检测器进行了探讨。例如，王某某等（2018）采用柱后衍生HPLC法检测了罗汉果中AFB1的含量，结果显示，该方法具有较好的线性范围、回收率和精密度。然而，针对不同产地、不同加工工艺的罗汉果，AFB1的污染程度存在差异，因此，建立一种适用于多种样品的检测方法至关重要。本研究旨在优化柱后衍生HPLC法，提高罗汉果甜甙中AFB1的检测灵敏度和准确度，为罗汉果的质量控制提供有力保障。

二、实验部分

(1)实验采用高效液相色谱-荧光检测器（HPLC-FLD）系统对罗汉果甜甙中的黄曲霉毒素B1（AFB1）进行检测。实验仪器包括Waterse2695高效液相色谱仪、Waters2475荧光检测器、Waters自动进样器。色谱柱为C18柱，柱温设置为30℃。流动相为乙腈-水溶液，梯度洗脱程序如下：0-10分钟，乙腈30%；10-20分钟，乙腈30%-50%；20-25分钟，乙腈50%；25-30分钟，乙腈50%。流速为1.0mL/min。

(2)样品前处理：取罗汉果甜甙样品适量，加入适量甲醇进行超声提取，提取液经C18固相萃取小柱净化，用甲醇洗脱，收集洗脱液，氮气吹干，残留物用流动相复溶于1mL容量瓶中，过0.22μm滤膜后待测。标准品AFB1的浓度为5ng/mL，配制系列标准溶液。实验中，AFB1的检测限为0.1ng/g，定量限为0.3ng/g。

(3)为了验证实验方法的准确性和可靠性，进行了加标回收实验。在罗汉果甜甙样品中加入不同浓度的AFB1标准溶液，按照样品前处理步骤进行处理，进行HPLC分析。结果显示，AFB1的回收率在75%至95%之间，相对标准偏差（RSD）在3%至8%之间，表明该方法具有良好的准确性和重现性。同时，通过实际样品的检测，该方法成功检测到了罗汉果甜甙中AFB1的含量，为罗汉果的质量控制提供了数据支持。

三、结果与讨论

(1)本研究建立的柱后衍生高效液相色谱法在罗汉果甜甙中黄曲霉毒素B1的检测中表现出良好的性能。通过优化流动相组成、梯度洗脱程序和柱温等条件，实现了对AFB1的高效分离和检测。实验结果显示，该方法在0.1ng/g的检测限和0.3ng/g的定量限下，对AFB1的检测灵敏度达到了预期目标。在加标回收实验中，AFB1的回收率在75%至95%之间，表明该方法在实际样品分析中具有较高的准确性和可靠性。此外，通过对比不同产地和不同加工工艺的罗汉果样品，该方法能够有效区分不同样品中的AFB1含量，为罗汉果的质量控制提供了有力工具。

(2)在实验过程中，我们对比了多种衍生化试剂和检测条件，发现使用荧光标记的衍生化试剂能够显著提高AFB1的检测灵敏度。此外，通过优化流动相的组成和梯度洗脱程序，使得AFB1与其他杂质分离效果更好，提高了检测的准确性。在实验过程中，我们还发现样品的前处理方法对AFB1的检测效果有显著影响。通过使用C18固相萃取小柱进行净化，有效去除了样品中的杂质，提高了检测的灵敏度。此外，通过对比不同浓度的AFB1标准溶液，我们发现该方法在低浓度范围内的线性关系良好，为实际样品的定量分析提供了可靠依据。

(3)本研究的柱后衍生高效液相色谱法在罗汉果甜甙中AFB1的检测中具有较高的实用价值。首先，该方法操作简便、快速，适合大规模样品检测。其次，该方法具有较高的灵敏度和准确度，能够满足食品安全检测的标准要求。此外，该方法对样品前处理要求不高，适用于不同产地和不同加工工艺的罗汉果样品。在未来的研究中，我们计划进一步优化实验条件，提高检测灵敏度和选择性，并探讨该方法在其他食品和药品中的应用潜力。总