酶分子的化学修饰.pptVIP

试剂特点：具有氧化性或还原性。氧化剂：H2O2，N-溴代琥珀酰亚胺可被氧化的侧链基团：巯基，甲硫基，吲哚基（Trp）、咪唑基，酚基等。还原剂：2－巯基乙醇、DTT等。可被还原的侧链基团：二硫键。芳香环取代反应I2＋?+HI甲基硫氰酸N端肽段03肽酰高丝氨酸内酯02C端肽段01蛋白质磷酸化是由蛋白激酶催化将ATP中的磷酸基团转移到氨基酸残基的功能集团上。常见的磷酸化修饰的基团：丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸的羟基磷酸化反应修饰反应：酰基化与烷基化酰基化修饰剂:三硝基苯磺酸（TNBS）、丹磺酰氯（DNS）烷基化修饰剂：2，4－二硝基氟苯（DNFB）、碘乙酸、碘乙酰胺、亚硝酸等来源：Lys,Arg,His,Gln020103050604常见基团的化学修饰反应：氨基01特定的氨基酸残基侧链基团的化学修饰02巯基的化学修饰氨基的化学修饰羟基的化学修饰咪唑的化学修饰胍基的化学修饰二硫键的化学修饰巯基的化学修饰5,5-二硫-2-硝基苯甲酸（DTNB）氨基的化学修饰乙基马来酰亚胺（NEM）氨基的化学修饰氨基的化学修饰氨基的化学修饰羧基的化学修饰咪唑基的化学修饰咪唑基的化学修饰胍基的化学修饰二硫键的化学修饰二硫键的化学修饰Chapter8ModificationofEnzymeMolecule酶分子的化学修饰Contentsofchapter81、酶分子化学修饰的基本原理2、酶分子化学修饰的方法学3、肽链有限水解修饰4、酶分子的侧链基团修饰GoGoGoGo5、大分子的结合修饰Go6、亲和标记Go8.1酶分子化学修饰的基本原理通过各种方法使酶分子的结构发生某些改变，从而改变酶的某些特性和功能的技术过程称为酶分子修饰。即：在体外将酶分子通过人工的方法与一些化学基团（物质），特别是具有生物相容性的物质，进行共价连接，从而改变酶的结构和性质。0102修饰剂分子存在多个反应基团，可与酶形成多点交联。使酶的天然构象产生“刚性”结构。1、如何增强酶天然构象的稳定性与耐热性大分子修饰剂与酶结合后，产生的空间障碍或静电斥力阻挡抑制剂，“遮盖”了酶的活性部位。2、如何保护酶活性部位与抗抑制剂如何维持酶功能结构的完整性与抗蛋白水解酶酶化学修饰后通过两种途径抗蛋白水解酶：大分子修饰剂产生空间障碍阻挡蛋白水解酶接近酶分子。“遮盖”酶分子上敏感键免遭破坏。酶分子上许多敏感基团交联上修饰剂后，减少了受蛋白水解酶破坏的可能性。如何消除酶的抗原性及稳定酶的微环境酶蛋白氨基酸组成的抗原决定簇，与修饰剂形成了共价键。破坏了抗原决定簇——抗原性降低乃至消除“遮盖”了抗原决定簇——阻碍抗原、抗体结合大分子修饰剂本身是多聚电荷体，能在酶分子表面形成“缓冲外壳”，抵御外界环境的极性变化，维持酶活性部位微环境相对稳定。壹提高酶的活力activity肆研究和了解酶分子中主链、侧链、组成单位、金属离子和各种物理因素对酶分子空间构象的影响structure叁降低或消除酶的抗原性immunologicalproperty贰增强酶的稳定性stability酶分子修饰的意义对酶分子进行修饰必须在修饰原理、修饰剂和反应条件的选择以及酶学性质等方面都要有足够的了解。01酶的稳定性热稳定性、酸碱稳定性、作用温度、pH、抑制剂等。02酶活性中心的状况活性中心基团、辅因子等。其他如分子大小、性状、亚基数等。038.2酶分子化学修饰的方法学修饰反应尽可能在酶稳定条件下进行，并尽量不破坏酶活性功能的必需基团，使修饰率高，同时酶的活力回收高。pH与离子强度pH决定了酶蛋白分子中反应基团的解离状态。由于它们的解离状态不同，反应性能也不同。修饰反应的温度与时间严格控制温度和时间可以减少以至消除一些非专一性的修饰反应。反应体系中酶与修饰剂的比例酶分子修饰的条件8.3肽链有限水解利用酶分子主链的切断和连接，使酶分子的化学结构及其空间结构发生某些改变，从而改变酶的特性和功能的方法。酶蛋白主链修饰主要是靠酶切/酶原激活法。a、胃蛋白酶原的激活酶蛋白的肽链被水解后，可能出现以下三种情况中的一种：引起酶活性中心的破坏，酶失去催化功能。仍维持活性中心的完整构象，保持酶活力。有利于活性中心与底物结合并形成准确的催化部位，酶活力提高。后两种情况，肽链的水解在限定的肽键上进行，称肽链有限水解。b、胰蛋白酶原（trypsinogen）的激活c、