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GB5413.20—2022

食品安全国家标准

婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定

1范围

本标准规定了婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定方法。本标准适用于婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定。

第一法酶比色法

2原理

试样经酸水解，再经酶作用后与显色剂反应生成有色物质，在一定浓度范围内，其颜色的深浅与胆碱含量成正比，外标法定量。

3试剂和材料

除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。3.1试剂

3.1.1三羟甲基氨基甲烷[(CH2OH)3CNH2]。

3.1.2苯酚(C6H5OH)。

3.1.3浓盐酸(HCl)。

3.1.4氢氧化钠(NaOH)。

3.1.5胆碱氧化酶：≥10U/mg,置于-20℃保存。

3.1.6过氧化物酶：≥250U/mg,置于2℃~8℃保存。

3.1.74-氨基安替比林(C11H13N3O)。

3.1.8磷脂酶D:≥60U/mg,置于-20℃保存。

3.2试剂配制

3.2.1盐酸溶液(1mol/L)：量取85mL浓盐酸注入约900mL水中，稀释至1000mL。

3.2.2盐酸溶液(3mol/L)：量取250mL浓盐酸注入约600mL水中，稀释至1000mL。

3.2.3三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液(Tris)(0.05mol/L)：准确称取6.057g三羟甲基氨基甲烷溶于500mL水中，用盐酸溶液(1mol/L)调pH至8.0±0.2,再用水定容至1000mL。此溶液在4℃冰箱中

可保存1个月。

3.2.4显色剂：取120U的胆碱氧化酶、280U的过氧化物酶、100U的磷脂酶D、15mg4-氨基安替比林和50mg苯酚置于100mL的容量瓶中，用0.05mol/LTris缓冲溶液溶解并定容。临用现配。

3.2.5氢氧化钠溶液(500g/L)：称取500g氢氧化钠，溶于水并稀释至1000mL,采用塑料容器储存。

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GB5413.20—2022

3.3标准品

胆碱酒石酸氢盐标准品(C9H19NO7,相对分子质量：253.25,CAS号：87-67-2)：纯度≥99%,或经国

家认证并授予标准物质证书的标准物质。3.4标准溶液配制

3.4.1胆碱（以胆碱氢氧化物计，相对分子质量121.18)标准储备溶液(2500mg/L)：准确称取在102℃±2℃烘至恒重的胆碱酒石酸氢盐522.5mg,用水溶解并转移至100mL容量瓶中定容，混匀。4℃以下避光保存，有效期3个月。

3.4.2胆碱标准工作溶液(250mg/L)：吸取10.0mL胆碱标准储备溶液于100mL容量瓶中，用水定容，混匀，4℃以下避光保存，有效期1个月。

3.5材料

3.5.10.45μm水性滤膜针头滤器。

3.5.2注射器：5mL或相当者。

4仪器和设备

4.1分析天平：感量分别为0.1mg和0.001g。

4.2恒温水浴装置：温度可控制在70℃±2℃和37℃±2℃。

4.3pH计：精度0.01。

4.4分光光度计。

5分析步骤

5.1样品前处理5.1.1样品预处理

准确称取20g（精确至0.001g)混合均匀的液态试样于100mL锥形瓶中，加入3mol/L的盐酸溶液10mL,加塞混匀。

准确称取5g（精确至0.001g)混合均匀的半固态或固态试样于100mL锥形瓶中，加入1mol/L的盐酸溶液30mL,加塞混匀。

5.1.2水解

将装有试样的容器放在70℃±2℃水浴中，放置3h（每隔30min振摇一次），冷却至室温。用氢氧化钠溶液(500g/L)调pH至3.5~4.0,转入50mL容量瓶中，用水定容至刻度。

5.1.3过滤

用滤纸过滤水解液，若滤液不澄清，用0.45μm水性滤膜针头滤器再次过滤。收集滤液待测。

5.2测定

5.2.1