组织培养育苗技术.ppt

培养基的成分（四）-----天然复合物和琼脂天然复合物：在植物组织培养的早期，人们发现天然提取物对愈伤组织的诱导和维持是很有益的。常用的有浓度为10～20%的椰乳（即椰子汁，CM）、0.01～0.05%的酵母提取液（YE），有时也用麦芽汁、番茄汁等来代替。现在发现，天然复合物并不是一切组织培养所必需的，但加入以后，可以起到一定的促进作用。琼脂；琼脂是常用的凝固剂，加入琼脂后可使液体培养基成为固体培养基。通常的用量为0.5～1%，加得太多，则培养基过硬，使培养材料不能很好接触，易使材料干燥枯死；用量太少，则培养基太软，使材料在培养基中不稳定，甚至下沉。选用琼脂以色白、洁净的为佳，必要时，可以对琼脂进行预先浸洗，以减少其中的无机盐和可溶性有机物的含量。12（二）培养基的种类长期以来，根据组织培养的不同目的和选用的不同材料，科学工作者们设计了不同种类的培养基。下面介绍几种培养基的应用情况：1．MS培养基：林木组织培养中应用最为广泛的MS培养基。2．LS培养基：基成分是大量元素、微量元素及铁盐同MS，曾用LS培养基培养杨树，欧洲云杉等。3．BL培养基：曾用此培养基培养花旗松。4．ER培养基：曾用此培养基培养大叶相思，但多用于豆科作物的培养。5．N6培养基：在我国广泛采用N6培养基进行禾谷类作物的花药培养。有些林木组织培养也曾采用此种培养基，如柑桔的花药培养和楸树的组织培养。6．MH培养基：该培养基曾用于油棕的胚培养、柚的胚乳培养以及桉属等树木的生根培养。培养基的制备步骤母液的配制和保存1．1试剂的称量：培养基的组成成分应是纯净的化学药品，一般应尽可能采用分析纯药品。为了保证培养基成分能够长期保持不变，一些标准成分应有适当数量的贮备。每次称量药品时，应特别注意防止药匙污脏而引起的药物交叉感染。称量时应特别细小，最好由两人校正，尤其是生长调节物质和微量元素，因其用量甚微，称量要非常精确。稍有差错，会给培养带来严重的影响。母液的配制和保存（二）母液的配制和保存：经常使用的培养基，可先将各种药品配成10倍或100倍的母液，贴好标签，放入冰箱保存，用时再按比例稀释。一般配成大量元素、微量元素、铁盐、维生素、按基酸等母液，其中维生素和氨基酸类可以分别配制，也可以混在一起。现以MS培养基为例加以说明（见表12）。配制母液一般用重蒸馏水或蒸馏水。植物生长调节物质的配制：配制的浓度一般为0.1～0.5毫克/毫升。吲哚乙酸（IAA）先用少量95%的酒精溶解后加水定容。萘乙酸（NAA）先用95%的少量酒精或热水溶解后加水定容。吲哚丁酸（IBA）用50%的酒精溶解后加水定容。2,4—二氯苯氧乙酸（2,4—D）用1N（N表示当量浓度）的NaOH溶解后加水定容。激动素（KIN）和苄基嘌呤（BA）先溶于少量1N的盐酸中，再加水定容。玉米素（ZT）先用少量95%的酒精溶解，再加水定容。培养基的制备：2-1做好各种准备。将贮藏母液按顺序排好。准备好所需用的各种玻璃器皿，如量筒、烧杯、吸管、玻璃棒、漏斗等，放在指定的位置。称好所需的琼脂、蔗糖，配好所需用的生长调节物质。准备好重蒸馏水及盖瓶用的棉塞、橡皮筋等。慢慢熔化琼脂由于琼脂比较难溶解，所以要及早放在水浴锅上，让其慢慢熔化。在琼脂中加入药品在量筒内放一定量的重蒸馏水，以免加入药液时溅开。再按母液顺序，依母液的浓度量取规定的量加入量筒中。母液加完后，再在量筒中加入一定量的生长调节物质。加完后可倒入溶化的琼脂中。注意：加入母液或生长调节物质时，应事先检查这些药品是否已变色或产生沉淀，已失效的就不要再用。在量筒内再放入蔗糖，定容到所需的体积，倒入溶化的琼脂中。继续加温，不断搅拌，直至使琼脂完全溶解。注意：琼脂必须要充分熔化，以免造成浓度不匀；培养基培养基太软，无法固定材料。pH值的调整：培养基配好后，再用0.1～1NrH-Cl（或NaOH）对培养基的pH值进行调整，一般保持在5.4～6.0左右为好。可用pH试纸或酸度计进行测试。经高压灭菌后pH值又会下降0.1～0.3左右。pH值的调整有的在灭菌前进行，也有的在灭菌后进行。培养基的分装；配制好的培养基要趁热分装。分装时要掌握好分装量。太多既浪费培养基，又缩小了培养材料的生长空间；太少则又影响生长，一般是占试管、三解瓶等培养容器的1/3～1/4左右为宜。分装时注意不要把培养基沾到管壁上，以免招致杂菌的危害，分装后立即塞上棉塞或加上盖子。有不同处理的还要及时做好标记。灭菌：培养基的灭菌采用高压气锅进行，在压力达1.1千克/平方厘米左右，保持10--20分钟即可。温度太高，时间太长，培养基会受破坏，激素及糖会分解。在培养基灭菌后取出放在桌子上，使其凝固，以后放到培养室中进行三