《硫酸软骨素酶活性的测定》征求意见.pdf

ICS07.080

CCSA40

中华人民共和国国家标准

GB/TXXXXX—XXXX

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硫酸软骨素酶活力的测定分光光度法

Determinationoftheactivityofchondroitinase—Spectrophotometricmethod

(点击此处添加与国际标准一致性程度的标识)

（征求意见稿）

在提交反馈意见时，请将您知道的相关专利连同支持性文件一并附上。

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

GB/TXXXXX—XXXX

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由全国生化检测标准化技术委员会（SAC/TC387）提出并归口。

本文件起草单位：

本文件主要起草人：

I

GB/TXXXXX—XXXX

硫酸软骨素酶活力的测定分光光度法

1范围

本文件描述了测定硫酸软骨素酶活性的分光光度法。

本文件适用于生化试剂硫酸软骨素酶AC和硫酸软骨素酶B活性的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

硫酸软骨素酶活力单位heparinlyaseactivityunit

以浓度为0.34g/L的1000μL硫酸软骨素钠（硫酸软骨素酶AC）或硫酸皮肤素（硫酸软骨素酶B）为

底物，在30℃、pH7.5的条件下，每分钟酶解产生1μmol4,5-不饱和糖醛酸所需的酶量。

注：酶活力单位以U表示。

4原理

硫酸软骨素酶催化底物硫酸软骨素钠或硫酸皮肤素裂解，会生成裂解产物4,5-不饱和糖醛酸。4,5-

不饱和糖醛酸在232nm波长下具有特征吸收峰。通过测定232nm下的吸光度值变化，结合4,5-不饱和糖

醛酸的A232nm摩尔消光系数，计算酶活力。

5试剂和材料

除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。

试剂

5.1.1硫酸软骨素钠（CAS号9082-07-9）：纯度≥99%，或经国家认证并授予证书的标准品。

5.1.2硫酸皮肤素（CAS号54328-33-5）：纯度≥99%，或经国家认证并授予证书的标准品。

5.1.3盐酸（HCl）

5.1.4三羟基甲基氨基甲烷（Tris）

5.1.5氯化钙（CaCl）

2

5.1.6氯化钠（NaCl）

1

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试剂配置

5.2.1盐酸溶液（6mol/L）

准确量取盐酸（5.1.3）50mL，置于100mL容量瓶中，加水稀释定容至刻度，摇匀。

5.2.2硫酸软骨素酶AC