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IL—6对结直肠癌耐药相关性研究

目的：探讨白介素6的表达对结直肠癌耐药性的影响。方法：运用RNA

过表达技术对原代培养的结直肠癌患者细胞株进行IL-6的过表达，Western-blot

进行过表达的验证，确保IL-6在细胞中过表达，检测过表达IL-6和其相应的对

照组（mock对照）两种细胞株的耐药性，药物选择为放线菌素D、阿霉素、5-

氟尿嘧啶、羟基喜树碱、丝裂霉素C、紫杉醇、新长春碱，MTT实验检测这些

药物的细胞活力（每个药物至少5个浓度），敏感度用IC50表示。考虑到实验的

严谨性，运用si干扰技术干扰IL-6的过表达，然后检测干扰和IL-6后耐药性是

否与过表达的细胞株相反。结果：蛋白印迹结果检测IL-6在转入原代培养的结

直肠癌患者细胞株中高表达，利用MTT结果将其换算成IC50，耐药性检测结果

显示过表达IL-6的结直肠癌患者细胞株的IC50高于其对照组，尤其a阿霉素和

紫杉醇两种药物，其IC50相对于对照组分别为152和560倍数，在干扰后耐药

性检测其IC50下降。结论：IL-6过表达可以加速结直肠癌患者细胞株耐药性。

結直肠癌以其复发率高、转移快、侵袭性强、恶性程度高著称，目前越来越

受到科学研究者的关注[1]。现在市场上用来抵抗结直肠癌的药物如阿霉素等为

阻断主要抑制DNA合拓扑异构酶Ⅱ，5-氟尿嘧啶、喜树碱（CPT）等类似物作

用机制独特主要抑制拓扑异构酶Ⅰ[2-3]。药物耐药性已成为临床上比较棘手的问

题，特别是在肿瘤治疗方面，关于其耐药性机制的有关研究已有很多报道，在这

些研究报道中研究较多的是MDR1编码的P糖蛋白，过表达MDR相关的转运

蛋白，如P糖蛋白和MRP1会导致肿瘤细胞抵抗化疗药物[4-6]。

细胞因子作为细胞间链接的中介物，起到非常重要的作用，包括细胞增殖、

分化、凋亡、信号转导和体内稳态，体内细胞因子的紊乱会导致各种疾病，包括

乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌，有些细胞因子能限制肿瘤细胞的生长，有些则能抑制

肿瘤细胞的生长，据报道细胞因子的失调与肿瘤的进程有关系[7-10]。

白细胞介素6（IL-6），能使B细胞前体成为产生抗体的细胞，和集落刺激

因子协同，能促进原始骨髓源细胞的生长和分化，增强自然杀伤细胞的裂解功能。

最初其发现在白细胞中发挥作用，随着研究的深入发现在部分骨髓细胞和肿瘤细

胞也可以产生和分泌IL-6[11-13]。IL-6作为一种多效应的细胞因子能调节细胞各

种功能，包括细胞增殖和分化，免疫防疫。也有报道研究表示IL-6与肿瘤发生

发展关系密切，其机制在于通过干预细胞粘附和表面抗原的表达来影响肿瘤的进

展[14-17]。但是IL-6在结直肠癌中的耐药性问题报到少见，基于此笔者集中在

研究IL-6与结直肠癌耐药性的关系。现报道如下1材料与方法

1.1细胞株选择人结直肠癌细胞株选自结直肠癌患者肿瘤原代培养，

10%FBS的DMEM培养基中（青霉素和链霉素各100U/mL），置于37℃，5%CO2

中培养，25g/L胰酶消化，实验用细胞均处于生长对数期。

1.2实验方法

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1.2.1稳定转染过表达的IL-6和低表达的结直肠癌细胞将处于对数期的人

结直肠癌细胞株种于六孔板中，保证每孔细胞量为（3～8）×105，lipo2000加入

5μL用100μL无血清培养基混匀，静置5min，同时过表