细菌内毒素测定操作程序.pdfVIP

方法：

本法系利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集的反应机理，以判断供试品中细菌内毒素的限量

是否符合规定的法。

适用范围：

宝船生物（）原辅料、、原液、成品等的内毒素检查。

职责：

操作人员：

严格按照本程序执行；

确保操作的准确性，数据的可靠性。

部门主管/经理：

确保文件的准确性、技术内容的完整性；

审核并查证其是否与实际过程一致；

确定培训需求并确保培训得到实施。

QA

核查过程和文件是否符合企业和/指南要求；

审核和批准SOP；

、回收、销毁、保存SOP及版本号控制；

程序：

1术语解释

1.1鲎试剂细菌内毒素品：系自大肠埃希菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎

试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。

1.2细菌内毒素工作标准品：系以细菌内毒素品为基准标定其效价，用于试验中的鲎

试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。

1.3细菌内毒素检查用水：系指内毒素含量小于0.015EU/ml（用于凝胶法）且对内毒素试验无

干扰作用的灭菌注射用水。

2仪器设备及耗材

电热恒温培养箱、旋涡混合器、移液器、时钟，无热原试管、无热原吸头、试管架、剪刀、

膜、75%棉。

3试剂

鲎试剂、细菌内毒素工作标准品、细菌内毒素品、细菌内毒素检查用水、细菌内

毒素检查用稀释剂Ⅱ、细菌内毒素快速检测试剂盒。

4条件要求

试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素。耐热器皿常用干热灭菌法

（250℃、30分钟以上）去除，也可采用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。若

使用塑料器械，如微孔板和与微量加样器配套的吸头等，应选用标明无内毒素并且对试验

无干扰的器械。

5供试品溶液的

某些供试品需进行复溶、稀释或在水性溶液中浸提制成供试品溶液。必要时，可调节被测溶

液（或其稀释液）的pH值，一般供试品溶液和鲎试剂混合和后溶液的pH值在6.0~8.0的

范围内为宜，可使用适宜的酸、碱溶液或缓冲液调节pH值。酸或碱溶液须用细菌内毒素检

查用水在已去除内毒素的容器中配制。缓冲液必须经过验证不含内毒素和干扰因子。

6内毒素限制的确定

药品、生物制品的细菌内毒素限制（L）一般按以下确定：

L=K/M

式中L为供试品的细菌内毒素限制，一般为EU/ml、EU/mg或EU/U（活性单位）表示；

K为人每千克体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/（kg•h）表示，注射剂K=5EU/

（kg•h），品注射剂K=2.5EU/（kg•h），鞘内用注射剂K=0.2EU/（kg•h）；

M为人用每千克体重每小时的最大供试品剂量，以ml/（kg•h）、mg/（kg•h）或U/（kg•h）

2计算。注射时间若不足1小时，按1小

表示，人均体重按60kg计算，表面积按1.62m

时计算。供试品每平方米体表面积计量乘以0.027即可转换为每千克体重计量（M）。

7确定最大有效稀释倍数（MVD）

最大有效稀释倍数是指在试验中供试品溶液被允许达到稀释的最大倍数（1→MVD），在不

超过此稀释倍数的浓度下进行内毒素限制的检测。用以下计算：