分子生物学讲座.ppt

基础理论部分第一章核酸的结构与功能第一节核酸的化学组成第二节DNA的一级结构与功能第三节DNA的二级结构与功能第四节DNA的三级结构与功能第五节RNA的结构与功能第二章DNA的生物合成第一节DNA的复制第二节DNA的损伤与修复第三章RNA的生物合成第一节转录作用第二节RNA转录后的加工与修饰第三节RNA的复制课程大纲第四章蛋白质的生物合成第一节参与蛋白质生物合成的物质第二节蛋白质生物合成过程第三节蛋白质合成的抑制剂第四节基因表达调控第五章DNA重组与基因工程第一节工具酶第二节基因工程载体（略）第三节目的序列与载体的连接第四节目的基因序列的来源和分离（略）第五节基因序列导入细胞第六节目的基因序列克隆的筛选与鉴定第七节克隆基因的表达专题理论部分电泳技术分子杂交文库构建遗传工程载体和载体构建（董）遗传标记及其应用PCR及其测序技术目的基因克隆的策略植物组织培养和转基因技术植物基因工程策略01040203上述损伤会最终导致DNA分子结构的变化，这种DNA分子水平上的突变是整体遗传突变的基础。DNA损伤后的改变，有以下几种类型：点突变(pointmutation)指DNA上单一碱基的变异。嘌呤替代嘌呤(A与G之间的相互替代)、嘧啶替代嘧啶(C与T之间的替代)称为转换(transition)；嘌呤变嘧啶或嘧啶变嘌呤则称为颠换(transvertion)。缺失(deletion)指DNA链上一个或一段核苷酸的消失。DNA损伤的后果插入(insertion)指一个或一段核苷酸插入到DNA链中。在为蛋白质编码的序列中如缺失及插入的核苷酸数不是3的整倍数，则发生读框移动(readingframeshift)，使其后所译读的氨基酸序列全部混乱，称为移码突变(frameshiftmutaion)。倒位或转位(transposition)指DNA链重组使其中一段核苷酸链方向倒置、或从一处迁移到另一处。双链断裂对单倍体细胞一个双链断裂就是致死性事件。010302致死性丧失某些功能改变基因型(genotype)而不改变表现型(phenotype)发生了有利于物种生存的结果，使生物进化研究需要突变，如突变体库的用途。突变或诱变对生物可能产生的后果二、DNA修复DNA修复(DNArepair)是细胞对DNA受损伤后的一种反应，这种反应可能使DNA结构恢复原样，重新能执行它原来的功能；但有时并非能完全消除DNA的损伤，只是使细胞能够耐受这种DNA的损伤而能继续生存，也许这种没有完全修复而存留下来的损伤会在适合的条件下显示出来(如细胞的癌变等)，但如果细胞不具备这修复功能，就无法对付经常发生的DNA损伤事件，，不能生存。所以研究DNA修复也是探索生命的一个重要方面。对不同的DNA损伤，细胞可以有不同的修复反应。(一)回复修复这是较简单的修复方式，一般都能将DNA修复到原样。光修复这是最早发现的DNA修复方式。修复是由细菌中的DNA光解酶(photolyase)完成，此酶能特异性识别紫外线造成的核酸链上相邻嘧啶共价结合的二聚体，并与其结合，这步反应不需要光。结合后如受300－600nm波长的光照射，则此酶就被激活，将二聚体分解为两个正常的嘧啶单体，然后酶从DNA链上释放，DNA恢复正常结构。后来发现类似的修复酶广泛存在于动植物中，人体细胞中也有发现。单链断裂的重接DNA单链断裂是常见的损伤，其中一部分可仅由DNA连接酶(ligase)参与而完全修复。此酶在各类生物各种细胞中都普遍存在，修复反应容易进行。但双链断裂几乎不能修复。碱基的直接插入DNA链上嘌呤的脱落造成无嘌呤位点，能被DNA嘌呤插入酶(insertase)识别结合，在K＋存在的条件下，催化游离嘌呤或脱氧嘌呤核苷插入生成糖苷键，且催化插入的碱基有高度专一性、与另一条链上的碱基严格配对，使DNA完全恢复。烷基的转移在细胞中发现有一种O6甲基鸟嘌呤甲基转移酶，能直接将甲基从DNA链鸟嘌呤O6位上的甲基转移而修复损伤的DNA。这个酶的修复能力并不很强，但在低剂量烷化剂作用下能诱导出此酶的修复活性。12切除修复（excisionrepair）是修复DNA损伤最为普遍的方式，对多种DNA损伤包括碱基脱落形成的无碱基位点、嘧啶二聚体、碱基烷基化、单链断裂等都能起修复作用。这种修复方式普遍存在于各种生物细胞中，也是人体细胞主要的DNA修复机制。切除修复12首先由核酸酶识别DNA的损伤位点，在损伤部位