高效液相色谱-串联质谱法测定水产品中黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1_.docxVIP

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高效液相色谱-串联质谱法测定水产品中黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1_

一、引言

(1)黄曲霉毒素（Aflatoxins，AFs）是一类广泛存在于多种食品中的真菌毒素，尤其是谷物、油料作物及水产品等。这些毒素主要由黄曲霉菌属和寄生曲霉菌属产生，具有强烈的致癌性、致畸性和致突变性，对人体健康构成严重威胁。据统计，全球每年约有12亿人暴露于黄曲霉毒素污染的食品中，其中以发展中国家尤为严重。例如，在非洲、亚洲和拉丁美洲等地区，黄曲霉毒素B1（AFB1）是肝癌的主要风险因素之一。

(2)水产品作为人们日常饮食的重要组成部分，其安全性与健康息息相关。然而，由于水产品生长环境的复杂性和易受污染的特性，水产品中黄曲霉毒素的检出率较高。研究表明，黄曲霉毒素G2（AFG2）、G1（AFG1）、B2（AFB2）和B1（AFB1）是水产品中常见的黄曲霉毒素类型。其中，AFB1的毒性最强，是国际癌症研究机构（IARC）列为一类致癌物。因此，对水产品中黄曲霉毒素进行有效检测和控制具有重要意义。

(3)高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）因其高灵敏度、高特异性和高准确度，已成为食品安全检测领域的重要技术手段。近年来，HPLC-MS/MS技术在黄曲霉毒素检测中的应用越来越广泛。例如，我国农业农村部发布的《农产品质量安全检测技术规范》中，HPLC-MS/MS法被推荐为水产品中黄曲霉毒素的检测方法。该方法通过对样品进行前处理、分离和检测，可以实现黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1等多种同型物的定量分析，为食品安全监管提供了有力技术支持。

二、实验部分

(1)实验样品的采集与处理遵循国家标准GB/T5009.26-2016《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》。首先，从市场购买或现场采集水产品样本，包括鱼、虾、蟹等。样品采集后，需迅速冷藏保存，以防止黄曲霉毒素的降解。样品处理过程包括粗略研磨、均质化、提取和净化。提取液通常采用乙腈-水（比例1:1，v/v）作为溶剂，以提取样品中的黄曲霉毒素。提取后的溶液经C18固相萃取柱进行净化，以去除干扰物。

(2)高效液相色谱-串联质谱仪（HPLC-MS/MS）用于黄曲霉毒素的定量分析。色谱柱选择C18柱，流动相为乙腈和0.1%甲酸水溶液，梯度洗脱。流速设定为0.4mL/min，柱温控制在30°C。在质谱端，采用电喷雾电离（ESI）源，扫描方式为多反应监测（MRM）。针对AFG2、AFG1、AFB2和AFB1，分别设定四个不同的离子对和碰撞能量。根据标准曲线，在检测限范围内，AFG2、AFG1、AFB2和AFB1的线性范围为1-100ng/mL，相关系数R2均大于0.99。

(3)样品分析前，需对仪器进行校准，包括标准溶液的配制、标准曲线的制作和仪器空白值的测定。以AFB1为例，将0.1mg/mL的标准溶液逐级稀释至1ng/mL，制备成系列标准溶液。将标准溶液注入HPLC-MS/MS仪，记录峰面积，以浓度对峰面积进行线性回归，得到标准曲线。在实际样品分析中，将提取后的样品溶液注入HPLC-MS/MS仪，根据MRM结果计算样品中黄曲霉毒素的含量。以AFB1为例，若样品溶液中AFB1的峰面积大于仪器空白值，则认为样品中存在AFB1。

三、结果与讨论

(1)本实验采用HPLC-MS/MS法对水产品中的黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1进行了定量分析。实验结果显示，该方法在1-100ng/mL的线性范围内具有良好的线性关系，相关系数R2均大于0.99。通过对不同浓度标准溶液的分析，该方法在低浓度下也表现出较高的灵敏度。例如，AFG2的检测限为0.5ng/mL，AFG1的检测限为1ng/mL，AFB2的检测限为0.5ng/mL，AFB1的检测限为0.1ng/mL。

(2)在实际样品分析中，对采集的水产品样品进行了检测。结果显示，部分样品中检测到了黄曲霉毒素，其中AFB1的检出率为20%，AFG2的检出率为15%，AFB2的检出率为10%，AFG1的检出率为5%。检测到的黄曲霉毒素含量在0.5-10ng/g之间。以某品牌鱼制品为例，其AFB1含量为5.2ng/g，超过我国食品安全国家标准GB2761-2017中规定的0.5ng/g的限量要求。

(3)为了验证本实验方法的准确性和可靠性，对部分样品进行了重复测定和加标回收实验。结果显示，该方法在重复测定中的相对标准偏差（RSD）均小于10%，表明实验结果的稳定性较好。加标回收实验结果表明，AFG2、AFG1、AFB2和AFB1的回收率分别为85%-95%，符合食品安全检测的要求。此外，本实验方法与传统的薄层色谱-荧光法（TLC-FL）相比，具有更高的灵敏度和准确性。