动物细胞与组织培养.ppt

贴附生长是大多数细胞在体内生长的基本存在方式。贴附型细胞在培养时能贴附在支技物表面生长。如羊水细胞为贴附型细胞，常表现为成纤维型细胞和上皮细胞生长。0201（一）贴附型细胞成纤维型细胞01在培养中的细胞凡形态与成纤维细胞类似时，皆可称之为成纤维细胞。本型细胞由形态与体内成纤维细胞的形态相似而得名.除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间质起源的组织细胞常呈本类形态生长。02人胚肺细胞在显微镜下呈现为典型的成纤维细胞型。03成纤维细胞（2）上皮型细胞:此类型细胞在培养器皿支持物上生长具有扁平状，01细胞呈扁平不规则多角形，中央有圆形核，细胞彼此紧密相连成单层膜。生长时彼此紧密连接成单层细胞。生长时呈膜状移动，处于膜边缘的细胞总与膜相连，很少单独行动。起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态。Hela细胞呈现为典型的上皮细胞型。02030405上皮型细胞此型细胞不很稳定，有时亦难和其它型细胞区别。在一定的条件下，由于细胞密度增大联成片后，可呈类似多角型或成纤维细胞形态。本型细胞在支持物上散在生长，一般不连成片。细胞质经常伸出伪足或突起，呈活跃的游走或变形运动，速度快且不规则。体外培养的游走型细胞具有类似巨噬细胞样的特征。主要是：单核巨噬细胞系统的细胞，淋巴细胞，肿瘤细胞。单核巨噬细胞1、游走型细胞在支持物上分散生长，一般不连接成片、形成群落；2、细胞胞质常伸出伪足和突起。3、生长位置不固定，呈游走和变形运动，速度快、方向不规则。4、细胞内易出现色暗的吞噬性颗粒。形态上不规则的细胞，一般分胞体和胞突两部分,如神经组织细胞.（二）非附型细胞A悬浮生长细胞：血液白细胞、淋巴组织细胞、某些肿瘤细胞、杂交瘤细胞、转化细胞系等。B这类细胞特点：胞体始终是球形、密度较高，培养效率高、易大规模生产。血清成分、培养基成分、添加成分、培养基的酸碱度、气相环境、温度等。如,Hela细胞原本是一种上皮型癌细胞,但在过酸或过碱的条件下培养,可以呈现梭形,当酸碱度适中时又可以恢复上皮型特征。五.影响细胞形态学特征的因素第三节动物组织细胞培养要求二培养工具:培养瓶、培养皿、培养管、多孔培养板等。010102细胞培养以玻璃器皿为主。器皿应选择透明度好、无毒、中性硬度玻璃制品。02根据培养细胞种类要求不同培养瓶的形态各异，用于细胞传代培养的细胞要求瓶壁厚簿均匀，便于细胞贴壁生长和观察，瓶口要大小一致，口径一般不小于1cm，允许吸管伸入瓶内任何部位。多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，讨论以下问题：体外培养的细胞需要什么样的环境条件？提示：无菌、无毒的环境。【讨论】体外培养细胞时需要提供哪些物质？提示：充足的营养供给、适宜的温度、适宜的pH和气体环境。三、培养条件

细胞在体外培养中所需的条件与体内细胞基本相同。2）PH：7.2-7.４当PH低于6或高于7.6时的生长会受到影响，甚至死亡。用来检测PH的变化：红色--pH7.4，橙色--pH7.0，黄色--pH6.5，蓝红色--pH7.6，紫色--pH7.8。3)气体：气体是人体细胞培养生存必需条件之一，所需气体主要有氧气和二氧化碳。氧气参与三羧酸循环，产生供给细胞生长增殖的能量和合成细胞生长所需用的各种成分。开放培养时一般把细胞置于95%空气加5%二氧化碳混合气体环境中。02ＣＯ２有调节PH的作用。01在保证细胞渗透压的情况下，培养液里的成分要满足细胞进行代谢所需要的各种营养，如包括十几种必需氨基酸及其他多种非必需氨基酸、维生素、碳水化合物及无机盐类等。只有满足了这些基本条件，细胞才能在体外正常存活、生长。动物细胞的培养基一般分为天然、合成、无血清培养基几种，此外细胞培养还需要一些常用的溶液。4）营养—培养基：1951年厄尔开发了供动物细胞体外生长的人工合成培养基(MEM)。合成培养基的种类相当多。合成培养基成分已知，便于对实验条件的控制。但与天然培养基相比，有些天然的未知成分尚无法用已知的化学成分所替代，因此，细胞培养中使用的基础合成培养基还必须加入一定量的天然培养基成分，以克服合成培养基的不足。最普遍的作法是加入小牛血清。人工合成培养基，如109培养液、DMEM、199、RPMI-1640，IMEM，MEM培养液等。合成培养基直接采用取自动物体液或从组织中提取的成分作培养液，主要有血清、组织提取液、鸡胚汁等。血清是天然培养基中最有效和最常用的培养成分。它含有许多维持细胞生长繁殖和保持细胞生物学性状不可缺少的未知成分。使用最普遍的天然培养基是血清，基本以小牛血清