专题10 生物技术工程（解析版）（3大模板）-2025年高考生物答题技巧与模板构建（新高考通用）.docx

专题10生物技术工程

模板01酶切位点的选择-既要相同又要不同

模板01酶切位点的选择-既要相同又要不同

模板02双标记筛选金标准—二去其一是为真

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设问关键词：限制酶的选择、目的基因的鉴定、PCR过程

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几种不同PCR的应用

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命题预测

基因表达载体的构建；标记基因的选择

关键技巧

目的基因和载体的酶切和连接是设计的核心；根据题目的具体信息判断保留和破坏的标记基因的类型

模板01酶切位点的选择-既要相同又要不同

【核心】相同黏性末端，正确连接方向

酶切位点的选择实际上有许多需要考虑的逻辑，但核心点是两个：

要保证质粒和目的基因的黏性末端相同，才能让质粒和目的基因的黏性末端相互连接。

要保证基因的头对着启动子，尾对着终止子，才能保证正确的转录。

除这两个原则之外，很多题目还会有额外的信息，如基因中间或质粒其他位置存在相同酶切位点、同尾酶等，要根据题目信息具体判断。

【基本知识】

（1）限制性内切核酸酶(简称“限制酶”)

（2）限制酶的选择

1.不破坏目的基因原则：如图甲中可选择PstⅠ，而不选择SmaⅠ。

2.保留标记基因、启动子、终止子、复制原点原则：质粒作为载体必须具备标记基因，所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构，如图乙中不选择SmaⅠ。若载体上有两个及以上的标记基因，则可合理对其中一些标记基因进行酶切破坏，从而达到比一个标记基因更高的筛选成功率，防止只有一个标记基因时出现的“假阳性”(即未成功导入目的基因的载体也能正常表达标记基因，造成无效筛选)。

3.善用“双酶切”，注意方向性：目的基因所在序列和载体上存在多种酶切位点时，一般需要选择在目的基因所在序列和载体上都存在切割位点的两种不同的限制酶，对目的基因所在序列和载体进行剪切，即“双酶切法”。其优点和作用是：①防止目的基因环化；②避免目的基因与载体反向连接，即用DNA连接酶连接后形成的重组DNA分子上，目的基因和载体启动子的方向(或描述为“RNA聚合酶的移动方向”)必须是相同的，否则目的基因导入后无法正常表达。如图甲、乙也可选择PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶。

4.巧用“同尾酶”：同尾酶指来源不同，但能产生相同黏性末端的限制酶。当不适合选择某种限制酶时，可用其同尾酶替换，以获得相同的黏性末端。

技巧01酶切位点的选择-既要相同又要不同

研究人员为寻求炎症性疾病的高敏感检测方法，以重组S100A8蛋白作为免疫抗原，制备了抗S100A8蛋白的单克隆抗体。下图是重组S100A8蛋白的制备过程，结合下表4种相关限制酶的识别序列和切割位点，可知切割质粒的限制酶为（????）

??

（注：S100A8蛋白是炎症反应时高度表达的一种蛋白质，可作为炎症性疾病诊断的重要标志物。）

HindⅢ

NcoⅠ

BglⅡ

XhoⅠ

5＇-A↓AGCTT-3＇

5＇-C↓CATGG-3＇

5＇-A↓GATCT-3＇

5＇-C↓TCGAG-3＇

A．HindIII和NcoⅠ B．BglⅡ和XhoⅠ

C．NcoⅠ和XhoⅠ D．HindⅢ和BglⅡ

【技巧点拨】【核心】相同黏性末端，正确连接方向-要保证质粒和目的基因的黏性末端相同，才能让质粒和目的基因的黏性末端相互连接；要保证基因的头对着启动子，尾对着终止子，才能保