血细胞分析仪原理讲解.pptx

血细胞分析仪原理

手工计数血细胞计数仪两分群（淋巴与非淋）三分群（淋巴、单个核、中性粒）五分群五分群＋网织红血细胞计数仪前世今生

血细胞分析仪的基本功能血液分析仪主要能完成三大功能：①细胞计数功能（红细胞、白细胞、血小板）②细胞分类功能(白细胞：三分群和五分群)③血红蛋白测定

检测原理电学光学电阻抗法激光散射法分光光度法

电学原理电阻抗法（又称Culter）的原理：血细胞是电的不良导体，当一个细胞通过计数小孔时，会导致小孔两端电阻变化，将其转化成脉冲，感应器通过检测脉冲的数量及大小，从而计算出通过小孔的细胞数量及体积。V=IR，电阻↑，电压↑（一）电阻抗法

电学原理（一）电阻抗法脉冲数量与细胞数量一致，脉冲高度与体积呈正比

电学原理（一）电阻抗法

电学原理（一）电阻抗法

电学原理的应用检测通道一：白细胞计数分析检测通道二：红细胞和血小板计数分析白细胞检测分析前，需先加溶血素溶解红细胞。溶血素破坏磷脂双分子层。（一）三分群血细胞分析仪

电学原理的应用（一）三分群血细胞分析仪（白细胞检测通道）经溶血素处理脱水后，血细胞体积大小发生了变化！！！

电学原理的应用（一）三分群血细胞分析仪（白细胞检测通道）红细胞和血小板共用一个小孔管，正常人红细胞体积和血小板体积间有一个明显界限（40fL），血小板计数准确容易。

电学原理的应用(二）射频电导法射频（radiofrequency,RF)指射频电流，是每秒变化大于10000次的高频交流电磁波。高频电流能通过细胞壁。用高频电磁探针渗入细胞膜脂质可测定细胞的导电性，提供细胞内部化学成分、细胞核和细胞质、颗粒成分等特征信息。

光（化）检测原理(一）激光散射法基本检测原理鞘液

光（化）检测原理(一）激光散射法基本检测原理1）荧光染料：碱性槐黄、噻唑橙、碘化丙啶等，主要用于核酸染色。（可用于网织红细胞计数）2）非荧光染料：亚甲蓝（核酸染色）、氯唑黑（用于单核细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞颗粒和白细胞的膜结构染色）和过氧化物酶试剂等。被染色部分可发生光吸收现象，使检测器接收到的散射光强度发生改变，从而区分细胞的种类。

光（化）检测原理(二）分光光度法朗伯-比尔定律（Lamber-Beer）是吸收光度法的基本定律。入射光I0透射光I式中A代表吸光度；T表示透光度或透射率；I0、I为入射光和透射光强度；c为吸光物质溶液的浓度；b为液层厚度；k为吸光系数。

光（化）检测原理(二）分光光度法用途：血红蛋白测定0.575光源单色器吸收池检测器显示

光（化）检测原理(二）分光光度法含氰化物溶血剂，540nm。不含氰化物溶血剂，如月桂酰硫酸钠（sodiumlaurylsulfate,SLS）法，当用HiCN法校准后，其检测的优点是既可达到与HiCN法相当的精密度和准确性，又可避免HiCN法试剂对操作人员的潜在危害和对环境的污染。

联合检测原理(一）容量、电导、光散射联合检测技术（volume，conductivity，scatter,VCS）电阻抗技术（测量细胞大小）电导性技术（测量细胞内部结构）光散射技术（测量细胞形态、细胞核和细胞颗粒）。

联合检测原理(一）容量、电导、光散射联合检测技术（VCS）体积电导光散射

联合检测原理(一）容量、电导、光散射联合检测技术（VCS）DF1（体积值和散射光值）DF2（体积值和电导值）DF3（体积值和电导值）

光（化）检测原理(二）电阻抗、传导、光散射和核酸荧光染色技术原理(1)4DIFF通道（白细胞分类通道）：利用流式细胞术和核酸荧光染色技术检测。利用专用溶血剂完全溶解红细胞和血小板，聚亚甲蓝核酸荧光染料可进入白细胞内，使DNA、RNA和细胞器着色。因为荧光强度与细胞内核酸含量成比例，所以未成熟粒细胞、异常细胞荧光染色深，成熟白细胞荧光染色浅，从而得到4DIFF白细胞散点图。

光（化）检测原理白细胞分类：DIFF通道溶血剂：完全溶解红细胞，在白细胞膜上打孔核酸染料：对核酸染色

光（化）检测原理(二）电阻抗、传导、光散射和核酸荧光染色技术原理SSC侧向散射光：内部复杂程度SFL侧向荧光：核酸含量和种类FSC前向散射光：细胞体积和颗粒数量

光（化）检测原理白细胞分类：DIFF通道纵坐标：侧向荧光（SFL），反映核酸含量横坐标：侧向散射光（SSC），反映细胞内容物复杂程度

光（化）检测原理加溶血剂后中性粒细胞嗜酸粒细胞内部形态－透射电子显微镜内部构造；淋巴细胞＜单核细胞＜中性粒细胞＜嗜酸性粒细胞加溶血剂前淋巴细胞 单核细胞

联合检测原理（2）白细胞／嗜碱性粒细胞(WBC/BASO)通