卵黄抗体生产.ppt

续（1）第三步是精提法：使用凝胶渗透层析、阴离子交换层析或超滤方法进一步纯化，获得纯度96%～99%的IgY。3.Akita等建立的水稀释法：先在微酸条件下用水稀释卵黄，分离出卵黄蛋白；再用盐析、超滤、乙醇沉淀、凝胶过滤等进一步纯化IgY。4.特异性抗体采用亲合色谱法纯化，离子交换层析法浓缩；或用免疫亲合法直接从水溶液中提取。5.普洛玛格公司的卵黄抗体纯化系统（PromegasEGGstractIgY）提供了快速和简易的IgY分离方法。该系统能在约1小时内提取2～5mg/ml纯度75%的IgY。提纯方法的选择取决于IgY产量、纯度、费用要求和技术水平。01常用ELISA测定IgY活性。02提纯后抗体冷冻或冻干保存。50%（w/v）蔗糖能在热、酸和高压等加工条件下阻止IgY变性，在不能冷藏或在加工过程中保护IgY活性。03对提纯的IgY进行微胶囊化处理能显著增强起抗胃蛋白酶和胃酸的能力。04续（2）IgY上述优势及其对病原菌感染的防御无动物种属差异使其在传染病的预防、诊断及治疗、免疫抗体监测、免疫分析、酶联分析以及做为功能食品因子和抗生素替代品都很有用，特别是用鸡高免卵黄抗体防治其他动物和人的肠道疾病。二、IgY应用技术AEDBC在水产养殖中的应用对仔猪和犊牛腹泻的防治在人医上的应用在奶牛上的应用在家禽中的应用内容目前国内应用卵黄抗体防治的禽病有传染性法氏囊、鸡新城疫、鸭病毒性肝炎、小鹅瘟、番鸭细小病毒、鸡减蛋综合征等。用IgY治疗IBD和ND混合感染。抗沙门氏菌LPS特异IgY阻止禽蛋和禽肉中沙门氏菌粘附、控制其增殖上发挥明显作用（H.H.Sunwoo等，2000）。IgY对雏鸡传染病的预防有独到优点；用于紧急预防接种见效快；IgY代替血清抗体对禽传染病做出诊断和疫苗免疫后抗体水平监测。（一）在家禽中的应用（二）在水产养殖中的应用通过饲料用IgY治疗鳗鱼爱德华氏菌症。卵黄抗体生产及应用技术进展李建涛2003年6月内容一、生产技术二、应用技术三、问题及展望IgY纯化、活性测定及保存IgY相对与IgG的优势IgY结构特点IgY转移时间、产量及影响产量的因素IgY产生过程DCBAE一、生产技术(一)IgY产生过程1.腔上囊是禽类特有的控制体液免疫的淋巴器官；2.腔上囊中B细胞受到抗原刺激后分化成浆细胞，后者分泌抗体进入血液；3.通过血液循环和输卵管上皮层分泌滤泡，产蛋鸡将母源抗体选择性分泌到卵黄内；4.卵黄中Ig主要是IgG，叫IgY（IgM和IgA转移到蛋清中）；5.小鸡通过IgY实现获得性被动免疫(猪、牛、马属通过初乳；兔通过胎盘)；6.卵黄中含有多种不同抗体（约200种，滴度取决于暴露程度；M.Coleman,2000)；7.用某种病原菌免疫母鸡，可产生特异性IgY，Sugita等（1996）用26种甲醛灭活病原菌免疫产蛋鸡，IgY可预防多种疾病。(二)IgY转移时间、产量及影响产量的因

素1.用HI、ELISA、ID检查卵黄中IgY，抗体应答形成时间晚于血清1～2周（TheresaHP,1985；鸭腺病毒），以后与血清测得的HI滴度一致，也有报道卵黄卵黄抗体具有累积作用；2.经加强免疫，卵黄中特异性IgY效价能维持数月奶至1年；3.一个卵黄约含100～400mgIgY，一只产蛋鸡每年可获得40～50gIgY（D.Carlander,2002），相当与30只家兔同期内血清IgG产量；4.卵黄中抗原特异性抗体数量占IgY平均10%，范围是5%（抗胰岛素抗体）～28%（抗鼠IgG抗体），取决于免疫个体、免疫程序及抗原的免疫原性；抗原的质与量（颗粒/可溶性抗原、类毒素/菌体抗原、活菌/死菌，免疫麻痹；高免疫原性和安全）机体方面，A包括产蛋鸡品种（来航鸡、洛岛红鸡及其杂交后代的特异性IgY最高平均浓度有显著差异（DCarlander,2002)、B产蛋率和产蛋间歇与IgY浓度、C蛋重及卵黄重、D营养影响免疫系统发育、免疫机能状况和生产性能、E健康状况（SPF鸡群，起码应无免疫抑制性疾病和垂直传播性疾病，对父母代IBD的免疫）免疫途径、免疫程序、佐剂影响IgY产量的因素包括：续（2）首免后第3、5、7和25周用弗氏不完全佐剂乳化抗原进行2～4次加强免疫，剂量逐步放大1～2倍。这种多次注射加强剂量的抗原使之产生较高自动获得性免疫的过程，称之为“超免疫作用”。02首免，胸肌注射0.5～1mg/羽弗氏完全佐剂等体积乳化抗原；01生产卵黄抗体典型的免疫程序（Li-Chan等，2000）：