第二章仪器检测技术分光光度法68讲解.ppt

第二章仪器检测技术分光光度法一、概述1、分光光度法：利用被测物质在特定的波长范围内对光的选择性吸收特征而建立的分析方法。属于光谱分析的吸收光谱。2、分类：紫外分光光度法（200--400nm）可见分光光度法（400—760nm）红外分光光度法（0.76微米—500微米）3、吸收定律（1）百分透光率T%=It/Io×100%It—透射光的强度，Io—入射光的强度。（2）吸收度A=lg1/T（3）朗伯-比尔定律A=ECLE-吸收系数C-溶液浓度L-液层厚度（cm）（4）吸收系数①百分吸收系数：在一定波长下，溶液浓度为1g/100ml,，液层厚度为1cm时的吸收度。（E1%1cm）②摩尔吸收系数：在一定波长下，溶液浓度为1mol/L,，液层厚度为1cm时的吸收度。（ε）例1、已知氯霉素的水溶液在278nm处有最大吸收，现用纯品配制成每100ml含2.0毫克的溶液，用1cm厚的吸收池在278nm处测得吸收度为0.596，计算氯霉素的百分吸收系数。E1%1cm=A/CL=0.596/2.0×10-3×1=298（5）吸收光谱曲线C、L一定时二、可见-紫外分光光度计主要部件1、光源可见光：钨灯、卤钨灯紫外光：氢灯、氘灯2、单色器3、吸收池比色皿、比色杯可见：玻璃紫外：石英注意：手持、装量、擦拭、配对试验（相对误差≤0.5%）