临床基因检测技术职业教育医学生物技术专业教学45讲解.ppt

聊城职业技术学院姜盼临床基因检测技术职业教育医学生物技术专业教学资源库基因检测的发展--测序技术测序技术的发展测序技术的发展PCR技术电泳技术芯片技术测序技术等产业的发展精准医疗助力人类健康。上游：测序设备与耗材。中游：测序及生物信息分析与诊断。下游：临床应用。技术的发展-PCR技术1953年，沃森和克里克发现了DNA双螺旋的结构，开启了分子生物学时代，极大地推动了核酸生物化学,分子生物学及分子遗传学等各类生命科学的迅速发展。1985年美国PE-Cetus公司人类遗传研究室的Mullis等发明了具有划时代意义的聚合酶链反应。ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC5’3’TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG3’5’DNA解旋解链合成引物子链延长GGAUCG5‘AUCGCG5‘TAGCGCTATCGCATCGACGCT3’ATAGCGTAGCTGCGAGGATCG3’DNA聚合酶DNA聚合酶技术的发展-核酸提取技术①核酸（nucleicacid）是遗传信息的携带者，是基因表达的物质基础。无论是进行核酸结构还是功能研究，首先需要对核酸进行分离和纯化。核酸样品质量将直接关系到实验的成败。②核酸提取的基本思路：利用DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异提取DNA、RNA，去除其他成分。琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物的方法，这种电泳方法以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。琼脂糖凝胶电泳的原理：核酸分子是两性解离分子，缓冲液pH8.0-8.3时核酸分子带负电，在电场中向正极泳动。不同的核酸分子的电荷密度大致相同，对泳动速度影响不大。在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。因此DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比。技术的发展-电泳技术琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段的大小范围较广，不同浓度的琼脂糖凝胶电泳可分离长度从200bp至近50kb的DNA片段。琼脂糖浓度(%)线型DNA分子的分离范围(Kb)0.35～600.61～200.70.8～100.90.5～71.20.9～61.50.2～312.00.1～2技术的发展-芯片技术基因芯片的原理是杂交测序，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法。在一块基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探针，当溶液中核酸序列（被荧光标记），与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时，通过确定荧光强度最强的探针位置，获得一组序列完全互补的探针序列。据此可重组出靶核酸的序列。技术的发展-测序技术1949年,FrederickSanger开发了测定胰岛素两条肽链氨基末端序列的技术,1953年测定了胰岛素的氨基酸序列。1950年，Edman提出了蛋白质的N端测序技术,后来在此基础上发展出了蛋白质自动测序技术。1965年，Sanger等发明了RNA的小片段序列测定法,并完成了大肠杆菌5SrRNA的120个核苷酸的测定。同一时期,Holley完成了酵母丙氨酸转运tRNA的序列测定。1975年，Sanger和Coulson发明了“加减法”测定DNA序列。1977年，Sanger在引入双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)后,形成了双脱氧链终止法,使得DNA序列测定的效率和准确性大大提高。1977年，Maxam和Gilbert报道了化学降解法测定DNA的序列。至今1950196019701980199020002010证实DNA是遗传物质（1952）发现DNA双螺旋结构；完成胰岛素氨基酸序列测定（1953）遗传密码的破译（1966）DNA重组技术（1974）提出加减法测序（1975）提出化学降解法测序和Sanger测序法（1977）发明PCR技术（1983）ABI首台商用测序仪（1986）荧光ddNTP商用测序仪（1987）启动人类基因组计划（1990）提出焦磷酸测序（1996）ABI毛细管电泳测序仪（1995）完成人类基因组计划；发明乳液PCR、边测序边合成技术、零模波导孔（2003）Roche推出454测序系统（2005）Life推出SOLID测序系统（2007）Illumina推出Solexa测序系统（2006）HelicosBioscience推出单分子