核酸核酸检测技术79讲解.pptxVIP

核酸Nucleicaciddetectiontechnology核酸检测技术核酸的提取-离心柱提取法

类型：真核生物DNA、细菌DNA、病毒DNA、质粒DNA、细胞悬液DNA、组织DNA核酸提取原则：1.保证核酸一级结构的完整性；2.核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；3.其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度；4.其他核酸分子，如RNA，也应尽量去除。组织基因组DNA提取-离心柱法

基因组DNA的纯化一般是通过裂解液处理样品，裂解细胞，将DNA从细胞核中释放出来，并使DNA与蛋白质分开，DNA仍留在上清液中，通过后续的异丙醇沉淀将DNA沉淀分离出来。样品的收集和保存尽量使用新鲜的组织材料采集样品若不能马上用于提取实验，置于-20℃或者-70℃以下存放样品应避免反复冻融反复冻融或长时间未低温冷藏的样品进行DNA的提取，所提取的DNA片段可能不完整，或收获量低。对于较难破碎细胞壁的细菌和酵母细胞，应尽量收集处于生长对数期的菌体，以取得最佳实验效果。

样品处理方式样品材料进行破碎（及匀浆）可以提高裂解效率，组织破碎后可以充分与裂解液接触，利于裂解。不同来源的组织材料，根据组织成份的差异，样品处理的方式也有所差异。一般来说，样品的破碎方式，主要有液氮研磨、匀浆和蛋白酶K消化法。细菌需要加入溶菌酶（Lysozyme）破碎细胞；酵母细胞