土壤中分解尿素的细菌的分离和计数.pptVIP

讲完第1点后讲课本P22中间楷体字内容引出2、3、4、内容讲完后讲P23楷体字部分一、课题背景1、尿素的利用尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、细菌利用尿素的原因土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶CO(NH2)2脲酶+CO2NH3+H2O㈠.筛选菌株04030102实例：启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，提供有利于目的菌株生长的条件。原因：因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。15.0g琼脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO42、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：①从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上属于哪类培养基？固体培养基②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？碳源：葡萄糖唯一氮源：尿素选择培养基培养基的唯一氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解利用尿素。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。3、培养基选择分解尿素的微生物的原理将土壤中自养微生物分离出来举一反三筛选出抗青霉素的微生物筛选出耐高浓度食盐的微生物……（1）将土壤中的固氮菌分离出来㈡.统计菌落数目：利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。1、显微镜直接计数：计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积（1mm2）和高（0.1mm）的计数室，在1mm2的面积里又被划分成25个（或16个）中格，每个中格进一步划分成16个（或者25个）小格，但计数室都是由400个小格组成。计数室操作：将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再将稀释的样品滴在计数板上，然后在显微镜下统计4～5个中格中的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按下面公式求出每毫升样品中所含的细菌数。计算公式：每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数。显微镜直接计数：利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察；缺点：㈡.统计菌落数目：2.间接计数法（活菌计数法）（1）常用方法：每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。（2）原理：稀释涂布平板法。说明设置重复组的重要性。在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。01为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。02统计的菌落往往比活菌的实际数目低。03注意事项设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。01对照实验是指除了被测试的条件外，其他条件都相同的实验。满足条件的是对照组，未满足条件的是实验组。02㈢.设置对照：完全培养基（牛肉膏蛋白胨固体培养基）与选择培养基接种后培养观察菌落数目。将未接种的培养基同时进行培养。判断培养基中是否有杂菌污染：判断选择培养基是否具有筛选作用：小结：对照组虽然不直接影响结果，但实验结论要有说服力，对照的设置是必不可少的。方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。.制备培养基：取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。从富含有机物、潮湿、