临床免疫分析发展趋势及化学发光技术应用.ppt

临床免疫分析发展趋势

及化學发光技术应用;-化學发光

-荧光偏振

-微粒子酶放大化學发光

電化學发光

-時间辨别免疫荧光

抗体芯片

透射和散射比浊

流式细胞技术;標识免疫學分析技术发展历程;放射免疫诊断技术（RIA）;方法;技术成熟度高

放射性（125I）污染和危害

125I的半衰期短，试剂有效期短

標识物125I的稳定性差，批间、批内的变异较大

原则曲线有效期短，必须每次定標

操作繁琐，出汇报時间長

無法保留备用。;成本低廉

定性、半定量和定量均可以检测

O.D值在低中浓度范围与酶活性呈线性关系

可以肉眼简朴判讀或酶標仪精确判讀成果;敏捷度高，检测低限达10-19mol

测定范围宽，可达9個数量级

自動化程度高，操作简朴

试剂稳定性好，無污染有效期6－24月;BAYERACS180;最先進的免疫學分析技术之壹

非開放性试剂系统；

试剂价格過高;免疫學检查技术发展趋势;;

简史：本世纪70年代中期Arakawe初次报道用发光信号進行酶免疫分析，运用发光的化學反应分析超微量物质，尤其是用于临床免疫分析中检查超微量活性物质。目前，這壹技术已從试验室的稀有技术過渡到临床醫學的常规检测手段。

原理：发光底物在酶的作用下，底物发生化學反应并释放出大量的能量，产生激发态的中间体。這种激发态中间体，當其回到稳定的基态時，可同步发射出光子。运用发光信号测量仪器即可测量光量子产额，该光量子产额与催化的酶的量成正比,由此可以建立原则曲线并计算样品中待测物质的含量.

CLIA试剂盒国产化程度已經较高，质量与国外产品的差距逐渐減小。

缺乏国产化的自動检测仪器;发光检测措施分类和對比

;【化學发光免疫分析种类】;原理图;【化學发光免疫分析种类】;;2、酶促化學发光或持久发光

原理：酶促化學发光壹般是将碱性磷酸酶（AP)或辣根過氧化物酶(HRP)標识在抗体或抗原上，固相抗体或抗原与AP或HRP標识的抗原、抗体复合物在发光底物AMPPD或Luminol作用下，持续发出可見光，通過光電倍增管讀取光信号。

特點：

碱磷酶体系：水解反应，起光较慢，发光强度较弱，敏捷度较高。

辣根酶体系：氧化還原反应，起光较快，发光??度较大。

代表仪器和试剂：

進口品牌：强生VitrosECi（鲁米喏），美国贝克曼企业的ACCESS（AMPPD）。

国产重要廠家：郑州安图（HRP-LUMINOL)、北京源德（HRP-LUMINOL)、泰格可信（HRP-LUMINOL)、科美東雅(AMPPD)、威海威高（HRP-LUMINOL)等;VitrosECi（鲁米喏）

原理图;3、電化學发光

原理：纳米磁珠分离後的三联吡啶钌標识的抗原抗体复合物，在三丙胺的作用下，发生氧化還原反应，发出可見光，通過光電倍增管進行光子计数，相對光强度RLU与待测抗原浓度成函数关系。

特點：激发发光過程复杂，時间長，每壹种发光過程约需25秒，测试速度慢。

代表仪器：瑞士ROCHE企业的ELECSYS1010和ELECSYS。;電化學发光检测技术（ELECSYS1010ELECSYS）

原理图;1結合了活化的三联吡啶钌衍生物即[Ru(bpy)3]2++N羟基琥珀酰胺酯（NHS）的抗-HBs和結合了生物素的抗-HBs与待测血清同步加入壹种反应杯中孵育9分钟

;将被链霉亲和素包被的磁珠加入反应杯中，再次孵育9分钟，使生物素通過与亲和素的結合将磁珠、

抗-HBs连接為壹体，形成双抗体夹心法;3蠕動泵将形成的[Ru(bpy)3]2+－抗体－抗原－抗体－磁珠复合体吸入流動测量室，此時，磁珠被工作電极下面的磁铁吸附于電极表面。同步，游离的抗-HBs（与生物素結合的和与[Ru(bpy)3]2+結合的抗体）也被吸出测量室;4蠕動泵加入含三丙胺（TPA）的缓冲液，同步電极加電压，启動ECL反应過程;5终止電压，移開磁珠，加入清洗液冲洗流動测量室，准备下壹种样品测定;4、免疫荧光

4.1時间辨别免疫荧光（TRFIA)

美国PerkinElmer

芬兰Wallac

新波

达安基因

4.2光激化學发光（Lica）

博阳

4.3多种技术综合

美国雅培AxSYMMEIA

曰本東曹MEIA;基本原理

TRFIA是用镧系稀土