义翘讲堂《全面的WB实验疑难解析及磷酸化蛋白检测技巧》.pdf

免疫实验技术全攻略

全面的WB实验疑难解析

及磷酸化蛋白检测技巧

滕敏

高级质控工程师

北京义翘神州科技股份有限公司

1WesternBlot技术介绍

2WesternBlot常见问题解析

CONTENT

3磷酸化蛋白检测技巧

4WesternBlot保证型抗体开发

义翘神州

01

WesternBlot技术介绍

义翘神州

WesternBlot技术介绍

WB（免疫印迹）技术概览

样本（蛋白质）样本转移到

检测目的蛋白目的蛋白可视化

电泳分离固相支持物

利用聚丙烯酰胺凝胶按照蛋白例如：NC膜或PVDF膜孵育一抗和二抗化学发光等检测方法

质的分子量大小进行分离

优势应用场景

高特异性、高灵敏度生物医学研究、疾病诊断、药物研发等

能够在复杂的蛋白质混合物中精准地在癌症研究中，可以检测肿瘤相关蛋白的表达水平变化

检测到特定的目标蛋白在免疫学研究中，能够分析免疫细胞中特定免疫分子的表达情况4

WesternBlot技术介绍

WB实验流程概述

样品制备电泳转膜（湿法）

WB显色展示目的蛋白可视化检测抗体孵育

化学发光仪荧光成像系统

5

WesternBlot技术介绍

WB实验技术要点样本制备

样品类型样本收集样本洗涤样本预处理样本制备

细胞样品制备细胞收集加预冷的裂解液

预冷PBS洗涤低温裂解，超声

加预冷的裂解液，

组织样品制备组织破碎研磨仪研磨

RIPA裂解液：成分较为复杂，包含离子型、非离子型去污剂和去垢剂，能有效裂解细胞并溶解蛋白，用于WB等实验

NP-40裂解液：非离子型去污剂，性质相对温和，在裂解细胞的同时可以保持蛋白的天然状态，用于IP实验

6

WesternBlot技术介绍

WB实验技术要点电泳

电泳过程是不同分子量蛋白进行分离，这是个产热过程，必要情况需增加冷