奴卡菌的培养与鉴定.ppt

*奴卡菌的培养及鉴定*一、分类与命名二、生物学特性（一）形态与染色1、革兰氏染色：革兰氏阳性或不定，无芽孢和鞭毛。菌体呈多向的分枝丝状，直径μm。培养早期可见丰富的菌丝体，常有次级分枝。培养后期菌体裂解为球形或杆状。巴西奴卡菌星形奴卡菌星形奴卡菌形态染色星形奴卡菌24h星形奴卡菌72h形态染色2、改良抗酸染色为弱阳性（1%硫酸水溶液），呈不均匀性，易被脱色呈阴性。奴卡菌星形奴卡菌星形奴卡菌形态染色3、痰标本直接涂片革兰氏染色可见典型的分枝菌丝，菌丝呈90°分枝角。有时不易着色或不均匀。痰涂片菌丝呈90°分枝痰涂片菌丝团痰涂片着色不均形态染色4、组织中细菌易聚集形成团块或微粒，在脓性分泌物中肉眼可见“硫磺颗粒”痰涂片弱抗酸染色血培养涂片革兰氏染色形态染色痰直接涂片抗酸染色革兰氏染色二、生物学特性（二）培养特性严格需氧，可在普通琼脂上室温或35℃缓慢生长，初代分离常需孵育1周。在不同培养基或培养时间菌落形态差异大，可出现光滑到颗粒状、不规则、皱褶或堆积的菌落。都能形成气生菌丝，使菌落表面出现粉状或天鹅绒样气生菌丝体，菌落有泥土气味。可产生不同的色素，如橙红、粉红、黄色、黄绿、紫色等。星形奴卡菌培养特性巴西奴卡菌培养特性星形奴卡菌的菌落11d，橙黄色，血平板12d，粗糙黄色，血平板血平板11d气生菌丝11d，MHA，黄色有棘突武国芬肺泡灌洗液和刷检物培养弱抗酸染色d，血平板革兰氏染色血平板11d气生菌丝11d，MHA，黄色有棘突抗酸染色三、鉴定与鉴别（一）属间鉴定诺卡菌属于其他需氧放线菌属如链霉菌属、拟诺卡菌属、红球菌属、马杜拉放线菌属以及棒状杆菌等形态形似的革兰氏阳性杆菌的属间鉴定：1.与链霉菌属、放线菌属和拟诺卡菌属的鉴别四者镜下形态均为分枝丝状，但诺卡菌属改良抗酸染色弱阳性，后者阴性。革兰氏染色菌丝与孢子链属间鉴定白色链霉菌拟诺卡菌MHA，9d，气生菌丝属间鉴定2.与分枝杆菌属的鉴别分枝杆菌抗酸性强，盐酸酒精不易脱色。而诺卡菌盐酸酒精易脱色。痰涂片，细胞内吞噬脓液涂片，条索状，V字形排列痰涂片，V，Y，X字形排列属间鉴定3.与红球菌属的鉴别两者均可呈现弱抗酸性，但马红球菌不产生气生菌丝。马红球菌48h粘液型马红球菌SBA粗糙型属间鉴定马红球菌24h弱抗酸马红球菌5d革兰氏染色属间鉴定4.与棒状杆菌的鉴别棒状杆菌不形成菌丝，菌体呈栅栏状排列。属内鉴定乙酰胺水解、抗生素敏感试验、芳香基硫酸酯酶、利用糖产酸、利用碳水化合物、七叶苷水解、明胶液化、硝酸盐还原、温度耐受、脲酶试验等。生化试验明胶液化试验:将菌液用白金针刺入明胶培养基内，35℃温育7d.取出放4℃15min,反复摇动试管至45°，观察有无液化的明胶流动。乙酰胺利用试验：将菌液接种于乙酰胺斜面，于35℃温育7d.斜面由淡黄橙色变为鲜明粉色为阳性。枸橼酸盐利用试验：将菌液接种于枸橼酸盐斜面，于35℃温育7d，如斜面呈蓝色为阳性。三、鉴定与鉴别与人体感染有关的诺卡菌种的生理生化特性菌种45℃生长葡萄糖阿拉伯糖侧金盏花醇肌醇鼠李糖半乳糖枸橼酸盐利用山梨醇利用尿素酶硝酸盐还原水解酪蛋白水解七叶苷水解腺嘌呤脓肿诺卡菌-+-----+-++---星形诺卡菌-+---vv+-++-+-皮疽诺卡菌++---+---+--+-巴西诺卡菌-+--+-++-++++-豚鼠耳炎诺卡菌V+v-+----++-++短链诺卡菌-----v------+-新星诺卡菌-+-------++---假巴西诺卡菌-+--+-++-+-+++南非诺卡菌v+-vv-v+v++-+-肉色诺卡菌---------+----少食诺卡菌+--------+----非洲诺卡菌++-------++---*