限时练25 单抗与双抗、基因编辑技术及其应用.docVIP

限时练25单抗与双抗、基因编辑技术及其应用

(时间：40分钟分值：50分)

【综合提升】

1.(10分)(2024·湖南雅礼中学调研)双特异性抗体可同时与癌细胞和免疫细胞特异性结合，它一端与癌细胞结合，一端与T细胞结合，将T细胞拉近癌细胞，大大提高了杀灭癌细胞的效率。CD19是癌细胞表面的抗原蛋白，CD3蛋白受体位于T细胞表面，与抗体结合后，其免疫功能得到激活。下图是研究人员通过杂交瘤细胞技术生产双特异性单克隆抗体的部分过程。回答下列问题。

(1)(2分)给小鼠注射CD19蛋白，是为了从小鼠的脾脏中分离得到____________________；注射的抗原A是指________。

(2)(4分)过程②和④所用诱导方法与诱导植物细胞融合所用方法的不同之处是________。过程③培养杂交瘤细胞时需提供的气体条件是95%空气和5%CO2的混合气体，其中CO2的主要作用是___________________________________

_________________________________________________________________。

过程⑤筛选获得的细胞具有的特点是________________________________

_________________________________________________________________。

(3)(4分)与从血清中提取的CD19抗体、抗A抗原的抗体相比，通过双杂交瘤细胞得到双特异性单克隆抗体的优点是_________________________________。

双特异性单克隆抗体治疗癌症的效果往往优于抗体CD19和A抗体的联合使用，原因是___________________________________________________

______________________________________________________________。

2.(11分)(2024·山东潍坊统考)CRISPR/Cas9系统可对基因组进行定点编辑，其工作原理如图1所示。该系统主要包含单链向导RNA(sgRNA)和Cas9酶两个部分，能特异性识别并结合特定的DNA序列，从而引导Cas9酶到相应位置并剪切DNA，最终实现对靶基因序列的编辑。请回答下列问题。

(1)(2分)图1为CRISPR/Cas9系统作用示意图，该系统能精准识别相关基因的原理是sgRNA与目标DNA发生________，Cas9酶可催化________(化学键名称)水解，剪切特定DNA片段。

(2)(9分)LMNA基因编码的核纤层蛋白与维持细胞核正常形态有关。科研人员利用CRISPR/Cas9技术对体外培养HepG2(人源肺癌细胞)细胞株进行基因编辑，获得了LMNA基因敲除的稳定细胞系。

①体外培养HepG2时需要一定比例的O2和CO2，其中CO2的主要作用是______________________；培养基除灭菌外还需要通过________________来保证无菌无毒环境。

②HepG2细胞中没有编码Cas9的基因，需将Cas9基因及sgRNA基因拼接形成拼接基因并与质粒结合导入HepG2细胞，用图2中的质粒以及含Cas9－sgRNA拼接基因的DNA片段构建表达载体时，应选用________进行酶切。

③将构建好的表达载体与用________处理的细菌置于适宜反应体系中培养。然后将培养的细菌涂布于含____________的平板培养基上，37℃培养，24h后挑取菌落，提取质粒作为模板，选择图3中引物组合________和________，通过PCR和电泳技术鉴定是否重组成功。

④用鉴定成功的工程菌对HepG2细胞进行转染，培养三天后收集HepG2细胞，提取基因组，对其________序列进行检测，判断Cas9－sgRNA拼接基因是否导入成功。若从细胞水平进行检测，可以检测HepG2细胞数目增长量或________。

3.(14分)(2024·河北卷，22)新城疫病毒可引起家禽急性败血性传染病，我国科学家将该病毒相关基因改造为r2HN，使其在水稻胚乳特异表达，制备获得r2HN疫苗，并对其免疫效果进行了检测。

回答下列问题：

(1)(4分)实验所用载体的部分结构及其限制酶识别位点如图1所示。其中GtP为启动子，若使r2HN仅在水稻胚乳表达，GtP应为____________启动子。Nos为终止子，其作用为____________________________________。r2HN基因内部不含载体的限制酶识别位点。因此，可选择限制酶________和________对r2HN基因与载体进行酶切，用于表达载体的构建。

(2)(4分)