细胞培养基本知识.ppt

完全培养基的组成基础培养基80％～95％血清5％～20％HEPES、碳酸氢钠按培养基的类型添加青、链霉素各100单位／毫升第30页，共44页，星期日，2025年，2月5日RPMI-1640培养基的配制：RPMI-1640培养粉1袋碳酸氢钠2.2gHEPES2.385g青、链霉素各100单位／毫升加三蒸水至1000ml,过滤除菌。调节pH值至7.2-7.4加血清（终浓度10％）第31页，共44页，星期日，2025年，2月5日第1页，共44页，星期日，2025年，2月5日细胞室准备室：用于进行培养器皿的清晰、包装、培养物质的准备和消毒以及供应物品的保藏等.缓冲间：为了减少将外界污染源头带入培养室培养室：是专门用于进行细胞培养和各种无菌操作的实验室。其基本条件是：清洁、无菌、干燥、不通风，并具有适宜的光线。第2页，共44页，星期日，2025年，2月5日体外培养的设备和器具超净工作台、CO2培养箱、倒置显微镜、液氮保存罐、离心机、水纯化装置、高压蒸汽消毒装置、酶标仪过滤除菌装置、手术器械、培养器皿、移液器第3页，共44页，星期日，2025年，2月5日超净工作台

利用鼓风机驱动空气通过高效空气微粒滤层净化后，徐徐通过工作台面，在操作区形成无菌环境。按气流方向的不同分为：1.外流式，2.侧流式第4页，共44页，星期日，2025年，2月5日CO2培养箱CO2培养箱设定的条件为37℃，5％CO2。使用CO2培养箱培养细胞时应注意的问题：①使用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微松，以保证通气。②保持培养箱内空气干净。定期消毒。③箱内灭菌蒸馏水3升，以保持箱内湿度，避免培养液蒸发。第5页，共44页，星期日，2025年，2月5日自动双重纯水蒸馏器第6页，共44页，星期日，2025年，2月5日培养器皿一次性培养瓶和培养板：一般朔料培养器皿的细胞生长面带负电荷，有利于大多数表面带正电荷的细胞贴壁生长玻璃培养瓶、溶液瓶、移液管第7页，共44页，星期日，2025年，2月5日常用玻璃器皿清洗浸泡：在5%稀盐酸溶液中浸泡12h以上，以达到软化器皿表面所附着物质，并中和器皿表面的碱性物质。刷洗：用软毛毛刷将浸泡后的其面在洗涤剂水中反复刷洗，以除去表面杂质。浸酸：利用强氧化作用清除器皿表面可能残留的有机物,时间在6小时以上最好过夜。冲洗：反复注满水、倒空达20次以上。最后用二次水浸洗2～3次，烘干后包装。第8页，共44页，星期日，2025年，2月5日清洁液的配制第9页，共44页，星期日，2025年，2月5日胶塞和塑料用品的清洗先在水中浸泡，然后用2%NaOH溶液煮沸10分钟，自来水冲洗晾干后，再用1%稀盐酸浸泡30分钟，最后分别用自来水和三次水各冲洗3次，烘干备用。第10页，共44页，星期日，2025年，2月5日过滤除菌装置1.不锈钢板式滤器：2.微孔滤膜滤器：有可换膜式滤器和一次性滤器两大类。第11页，共44页，星期日，2025年，2月5日细胞培养的概念原代培养：就是初次培养，即培养物一经接种到培养皿中就不再分割，任其生长繁殖而不更换生长器皿。它包括：细胞培养、组织培养、器官培养。传代培养：随着培养时间的延长、细胞分裂繁殖，细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度逐渐减慢甚至停止，在这种情况下，都需要将培养物分割成小的培养。第12页，共44页，星期日，2025年，2月5日原代培养细胞的生命归宿原代培养期传代培养期衰退期第13页，共44页，星期日，2025年，2月5日体外细胞培养物的生长类型贴附生长：必须贴附于支持物表面才能生长。见于各种实体瘤细胞。悬浮生长：于悬浮状态下即可生长，不需要贴附于支持物表面。见于各种造血系统肿瘤细胞。第14页，共44页，星期日，2025年，2月5日每代贴附生长细胞的生长过程游离期：细胞接种后在培养液中呈悬浮状态．也称悬浮期。此时细胞质回缩，胞体呈圆球形。贴壁期：细胞附着于底物上，游离期结束潜伏期：此时细胞有生长话动，而无细胞分裂。对数生长期：细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳，最适合进行实验研究。停止期（平台期）：细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分裂。其机