细胞培养基本方法从体内到体外.ppt

（2）消化酶抑制剂（enzymeinhibitor）３、其它常用液贴壁生长的细胞传代时须使用消化酶使细胞脱离生长表面。在含血清培养时，血清中的某些成分可中止消化酶对细胞的作用。在无血清培养时，则必须使用消化酶抑制剂，以保护细胞免受残留的消化酶的损害。目前常用的酶抑制剂是大豆胰酶抑制剂。（四）培养用液第63页，共97页，星期日，2025年，2月5日３、其它常用液（3）pH调整液1)NaHCO3溶液：为了使培养液营养成分稳定和延长贮存时间，一般不预先在培养液中或平衡盐溶液中直接加入NaHCO3，而是单独配制，消毒除菌后，在使用前加入。2)HEPES溶液：HEPES的化学名全称为：羟乙基哌嗪乙硫磺酸。它是一种氢离子缓冲剂，能较长时间控制恒定的pH范围，尤其是在开瓶通气培养或观察时能维持正常pH。（四）培养用液第64页，共97页，星期日，2025年，2月5日３、其它常用液（4）抗生素液为了预防因无菌操作不严而发生污染，培养液内一般需加入适量的抗生素。用于体外培养的抗生素以青霉素应用最普遍。通常在培养液中的终浓度为20～100ＩU/ml。青霉素可以和链霉素（使用浓度为50μg/ml)联合应用抑制耐青霉素的菌株。（5）谷氨酰胺溶液（略）（四）培养用液第65页，共97页，星期日，2025年，2月5日实验课时间：从第14周开始实验课地点：104馆三楼东边注意事项：1.网上没有名字的同学请不要填报实验课名单。2.现在不能确定自己时间的同学不要填报，可以下次上课时再报。3.一旦填报就不能再更改时间。第66页，共97页，星期日，2025年，2月5日１、无污染的气、液相环境２、温度３、生长基质O2CO2液相环境多聚赖氨酸纤维连接蛋白胶原层粘连蛋白亲玻粘连蛋白韧粘素（五）细胞在体外生长的其它条件第67页，共97页，星期日，2025年，2月5日１、无污染的气、液相环境体外培养技术特别强调无菌操作。组织取材、细胞分离、种植、传代、孵育以及利用培养的细胞进行各种实验时，都必须在无污染环境下进行；培养所用的各种器具、液体以及其它用品都需严格消毒灭菌，以保证培养物不被污染。在无污染的前提下，必须为培养物提供适宜其生存和生长的气、液相环境。（五）细胞在体外生长的其它条件第68页，共97页，星期日，2025年，2月5日真空式过滤器第31页，共97页，星期日，2025年，2月5日正压式不锈钢滤器抽滤式玻璃简易型滤器第32页，共97页，星期日，2025年，2月5日针头式滤器第33页，共97页，星期日，2025年，2月5日（１）大型设备和仪器（２）培养器具过滤除菌装置手术器械培养器皿移液器特殊用具杂用品２、体外培养实验室的设备和器具第34页，共97页，星期日，2025年，2月5日第35页，共97页，星期日，2025年，2月5日第36页，共97页，星期日，2025年，2月5日细胞过滤器细胞冻存管微量移液枪吸头第37页，共97页，星期日，2025年，2月5日１、水与平衡盐溶液(balancedsaltsolution，BSS)２、培养液(culturesolution)３、其它常用液进行体外培养离不开适应细胞在体外生存和生长的各种溶液，此即培养用液。培养用液主要包括培养液、缓冲液、平衡盐溶液、血清以及消化液、pH调整液和抗生素液等其它常用液。（四）培养用液第38页，共97页，星期日，2025年，2月5日１、水与平衡盐溶液水与缓冲液生理盐水与平衡盐溶液培养用水缓冲溶液生理盐水平衡盐溶液２、培养液３、其它常用液（四）培养用液第39页，共97页，星期日，2025年，2月5日１、水与平衡盐溶液水是培养用液最主要的溶剂。培养用液中的其它成分只有溶解于水中才有利于细胞吸收摄取。用金属蒸馏器制备的蒸馏水（distilledwater，DW），可能会含有某些金属离子，一般不作为培养用水。配制培养用液应用经石英玻璃蒸馏器三次蒸馏的三蒸水或超纯水净化装置制备的超纯水。二次蒸馏水或外购的纯水只能用于清洗。（１）水与缓冲液（buffersolution）培养用水：（四）培养用液第40页，共97页，星期日，2025年，2月5日蒸馏水的贮存也很重要，蒸馏水应贮存于密封的清洗干净的玻璃瓶内，最好用龙头瓶贮存，用时由瓶下端的玻璃龙头放水。尽量少开启瓶口或从瓶口倒水，以防周围不洁的环境和空气污染水。制备的水存放时间不宜太长，一般不超过2周，最好现制现用。若将所制备的蒸馏水经高压蒸汽消毒，可密封存放较长时间。（四）培养用液１、水与平衡盐溶